Cromatografia de proteinas

Practica 3
Cromatografía de aminoácidos

Objetivos
*Identificaran cada uno de los aminoácidos para después hacer la cromatografía de algunos de ellos en placa fina.
Introducción
En esta práctica se realizara la cromatografía de aminoácidos, para ello se necesita saber que son y cuáles son los aminoácidos. Los aminoácidos son moléculas orgánicas con un grupo amino (-NH3) y un grupocarboxilo (-COOH; ácido). Los aminoácidos más frecuentes son aquellos que forman parte de las proteínas. Todos con excepción de la prolina poseen grupo amino primario y un grupo acido carboxílico como sustituyentes en el mismo átomo de carbono. Los aminoácidos son 20:
1.-Alanina 11.-Leucina
2.-Arginina 12.-Lisina
3.-Asparagina 13.-Metionina
4.-Acido aspártico 14.- Fenilalanina5.-cisteina 15.-Prolina
6.-Acido glutámico 16.-Serina
7.-Glutamina 17.-Treonina
8.-Glicina 18.-Triptofano
9.- Histidina 19.-Tirosina
10.- Isoleucina 20.-Valina
De ellos la Glicina es el único aminoácido que no puede desviar la luz polar a ningún lado, debido a que no tiene Carbono asimétrico o quiral. La glicina es el más pequeño y la Prolina posee un grupo aminosecundario y por lo tanto es alfa- iminoácido.
Su estructura general es la misma solo varia R:


Material por grupo:
-Cámara de cromatografía
-Estufa

Material por equipo:
-Papel Whatman número 3 de un tamaño de 7 cms. X 10 cms.

Reactivos:
-Butanol
-Ácido acético
-Acetona
-Aminoácidos
-Ninhidrina al 1% en etanol

Procedimiento:
I.-Cámara de cromatografía
Saturar la cámara decromatografía una hora antes de comenzar la practica con una mezcla de butanol: acido acético y agua (4 : 1 : 5)
II.-Procedimiento para la corrida de muestras
1.-aplicar las muestras a un centímetro y medio de distancia de la orilla, de los aminoácidos. De los problemas y de saliva.
2.-Introducir el papel en la cámara
3.-Dejar correr aproximadamente 20 minutos.
4.-Sacar el papel de la cámaray dejar secar
5.-Rociar con Ninhidrina y revelar en la estufa a 90º C por 5 minutos

Resultados

Resultados
Aminoácidos
1: Alanina: color púrpura oscuro
2: Histina: color violeta
3: Triptina: color púrpura
4: Prolina: color amarillo
5: Saliva: sin color visible

Rf= distancia recorrida por la muestra / distancia que recorrió el solvente.
Alanina:
Rf= 1 cm / 2.8 cm = 0.35 cm.Histina:
Rf= 0.9 cm / 2.8 cm = 0.32 cm.

Triptina:
Rf= 0.9 cm / 2.8 cm = 0.32 cm.

Prolina:
Rf= 1.5 cm / 2.8 cm = 0.53 cm.

Saliva:
Rf= ¿?/ 2.8 cm = ¿? (sin resultados visibles)



Discusión de resultados
La cromatografía en papel se utilizó para la separación de cantidades mínimas de soluto y también como un criterio de pureza. Se basó en la diferente velocidad con que se muevecada uno de los solutos a través de una fase estacionaria que es el agua retenida sobre un soporte sólido e inerte (celulosa), arrastrado por un disolvente en movimiento.
Una vez realizada la cromatografía, la posición de los componentes se determina mediante una técnica que permita “visualizarlos”. Es común revelar el cromatograma mediante reacciones que originen productos coloreados, como laninhidrina.
El fundamento del revelado con ninhidrina es el siguiente: La ninhidrina reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formación de amoníaco y anhídrido carbónico, con reducción del reactivo (la ninhidrina) a hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su vez con amoníaco y otra molécula de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta unacoloración azul-púrpura, con la excepción de la prolina que da una coloración amarillenta, debido a que su grupo amino está sustituida.
En el periodo de 7 minutos pudimos observar este comportamiento de los aminoácidos dando como conclusión que dependiendo de su grupo amino es la distancia que recorre sobre el papel al reaccionar con la ninhidrina

CUESTIONARIO
1. Explicar en qué consiste la...