Separación de proteínas por cromatografía de exclusión molecular

Universidad Santiago de Chile
Facultad Ingeniería
Departamento Ingeniería Química
Ingeniería en Biotecnología

Separación de proteínas por Cromatografía de Exclusión Molecular

Introducción:La mayoría de las experiencias bioquímicas requieren de la separación de las proteínas, ya sea parcial o total, éstas últimas se realizarán dependiendo de los datos que se deseen obtener de dichasproteínas. Un método de separación usado frecuentemente y que es utilizado para determinar la composición de ciertas mezclas complejas es la cromatografía. Éste método utiliza métodos de separaciónfísicas como la presión (que es el caso que será analizado) o afinidad, y que cuenta con una fase estacionaria y una fase móvil. La fase estacionaria, la mayoría de las veces es un sólido que sirve paraseparar elementos de la fase móvil de tal manera que facilite la purificación y análisis de esta última. La fase móvil es la fase que se desea analizar, se puede encontrar como gas, líquido o fluidosupercrítico y se desplazará en la fase estacionaria dependiendo de la polaridad o peso molecular (En este caso, dependerá de éste último).
Un método usado con frecuencia para la purificación parcialde una mezcla es la cromatografía de exclusión molecular que utiliza un filtro (polímero granulado), de manera que las moléculas con pequeño peso molecular atraviesen este filtro rápidamente y seanlas primeras en extraerse en pequeñas muestras. En cambio, las moléculas con peso molecular mayor son retenidas provocando así que sean extraídas con mayor lentitud y la separación con las otrasmoléculas sea mayor.
Al finalizar la separación, las muestras pueden ser analizadas mediante un cromatógrafo, un espectrofotómetro o un espectrómetro de masas. La utilización de uno de estos aparatosdependerá de la cantidad de muestras obtenidas, la naturaleza de la mezcla que se desea purificar, la capacidad de manipulación, tiempo, etc.

Objetivo: Separación de una mezcla de proteínas por medio...