CUANTIFICACI N DE PROTEINAS


CUANTIFICACIÓN DE
PROTEÍNAS




Asier Cia Urdiain
Biología
Grupo 1
1. Introduccion
En esta práctica realizamos una cuantificación de proteínas, mediante la realización de una recta de calibrado yla medida de una muestra problema. Para ello utilizamos una serie de materiales entre los que destaca el colorímetro, que nos sirvió para medir la absorbancia.
2. Material utilizado
-Colorimetro-Micropipeta (pipeta pequeña)
-Tubos -Pipeteador
-Pipeta -Tubos pequeños para el colorimetro
3.Procedimiento a seguir
-En primer lugar introducimos en 5 tubos distintos 0, 20, 40, 60 y 100µl de proteínas con una concentración de 0,6 mg/ml que corresponde a 0, 12, 24, 36 y 60µg y lo rellenamoscon agua el resto, hasta llegar a un total de 0,1ml en cada tubo.
-Posteriormente introducimos en cada tubo 4,9ml de reactivo Bradford (solución comercial previamente diluida, que contiene elcolorante azul de Coomassie) hasta tener un total de 5ml de disolución en cada tubo, eso sí, cada uno con un porcentaje distinto de cada cosa.
-El siguiente paso que realizamos fue agitar un poco cada tubo ydejarlo reposar unos 10-15 min para que se produjera la reacción.
-Posteriormente introdujimos unos ml en un tubo cuadrado pequeño, el cual introducíamos en el colorímetro. El truco de esto era echarel tubo que no tenía proteínas y tomarlo como punto cero con el colorímetro y después ir calculando la absorbancia de cada muestra, (la de 20, 40, 60, y 100µl).
- Sin embargo nuestro colorímetro nopodía tomar la absorbancia 0, con lo que tomamos la mínima absorvancia que se podía y utilizamos ese como punto 0 que fue la que tenía 0µl de proteína.
-Los datos que obtuvimos fueron los siguientes:▪Muestra con 0µl o 0µg de proteína → 0,30 de absorbancia.
▪Muestra con 20µl ó 12µg de proteína → 0,42 de absorbancia.
▪Muestra con 40µl ó 24µg de proteína → 0,55 de absorbancia.
▪Muestra con 60µl ó...