Derivatización de ácidos grasos

La derivatización es el proceso mediante el cual se transforma el analito por una reacción química a un derivado más fácil de analizar. En el caso de la cromatografía de gases se derivatiza paraobtener especies más volátiles y no tener que usar temperaturas demasiado altas que puedan descomponer los analitos en el equipo, o la precipitación indeseada en la columna que ensucia la columna y ademásaltera los resultado obtenidos. Otra posible razón por la que se usa la derivatización es para la inserción de un grupo funcional que aumente la resolución en la detección.

Los métodos dederivatización se dividen en métodos de pre-columna y post-columna, dependiendo del medio en el que se realiza la derivatización.

Los ácidos grasos en la naturaleza se encuentran principalmente en laforma de triglicéridos, que están compuestos de tres diferentes ácidos grasos diferentes, que normalmente son lineales y saturados con un número par de carbonos. Los triglicéridos deben ser hidrolizadosa ácidos grasos libres, y posteriormente metilados para formar los metilesteres de ácido graso (las siglas son FAMEs, de fatty acid methyl ester).

En éste caso se usó la saponificación (hidrólisisdel glicerol catalizada por una base, en este caso fue KOH):

Luego se hizo la acidificación de la muestra a pH 3 para protonar los ácidos grasos y obtener los ácidos grasos “libres”.Posteriormente se realizó la esterificación de los ácidos catalizada por ácido y metanol:


Normalización como Método de Cuantificación

Las condición más importante para usar éste método es que el detectortenga la misma sensibilidad para todos los analitos (es decir que la respuesta/masa sea constante). Además se requiere que todos los analitos sea eluídos y detectados. Se empleó el método denormalización para cuantificar los ácidos grasos. En este método se toma el área total de todos los picos detectados, es decir, la sumatoria de todos los picos: ∑_i▒A_i (donde Ai es el área de cada uno) y...