Determinacion de coliformes

Determinación de coliformes totales por cuenta en placa

OBJETIVOS
* Comprender y realizar adecuadamente la determinación de coliformes fecales totales, mediante la cuenta en placas vertidas.
* Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo con las normas aplicables.

GENERALIDADES
* La definición generalmente aceptada para el término “coliformes” describe a estosmicroorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que fermentan producción de ácido y gas, aunque algunos pueden ser fermentadores tardíos o no fermentadores, como Citrobacter y Serratia, respectivamente.
* La mayoría de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto digestivo de animales, por lo cual son expulsados especialmente en las heces,por ejemplo Escherichia coli. Por esta razón, su presencia constante en la materia fecal, los coliformes son el grupo más ampliamente utilizado en la microbiología. Como los coliformes también pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre coliformes totales y coliformes fecales.

El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:

* La detección de prácticassanitarias deficientes en el manejo y en la fabricación compostas.
* La evaluación de la calidad microbiológica de un producto, aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario, cuando los coliformes son de origen no-fecal.
* Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas en el equipo.
* La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes, puederealizarse mediante el empleo de medios de cultivos líquidos o sólidos con características selectivas o diferenciales. Para la cuenta en placa se usa el agar-lactosa-bilis-rojo violeta (ABRV).

FUNDAMENTO
Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se desarrollan en ABRV, ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la precipitación de las sales biliares por loque las colonias son color rojo oscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa.
La posibilidad de contar las colonias se fundamenta en su dispersión y separación, como se explicó en la técnica de preparación de diluciones.
NOTAS
Cuando se utiliza el medio de agar bilis rojo violeta (ABRV) para la cuenta en placa de coliformes, debeconsiderarse lo siguiente:
• El medio no debe esterilizarse ni sobrecalentarse por lo que se debe utilizar antes de 3 h. a partir de su preparación; en cuanto se disuelva el agar se debe colocar en baño de agua a 45 °C para mantenerlo fundido, hasta el momento de utilizarlo.
• Debe ponerse una sobre capa de medio una vez que las placas vertidas han solidificado, para favorecer lascondiciones de microaerobiosis, más adecuadas para los coliformes.
• El sobrecalentamiento del medio y las variaciones en las condiciones de incubación, especialmente la incubación prolongada, pueden ocasionar la formación de colonias rojas de cocos Gram positivos.
• El rango estadístico para tener confiabilidad en el aspecto cuantitativo (de sensibilidad del método) es de 15 a 150 UFC por placa.• El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que finalmente se vierten los medios de cultivo en las cajas con las muestras de diluciones, no debe exceder de 20 minutos.

MATERIAL Y EQUIPO

* Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1.0ºC, provista con termómetro calibrado. A
* Baño de agua con termómetro calibrado,que mantenga la temperatura a 45 ±1.0 °C. a
* Utensilios estériles (cuchillo, tenedor, cuchara, pinzas) para tomar muestra
* Balanza granataria
* 22 tubos de ensaye con tapa esteriles
* Pipetas bacteriológicas de 1 mL, estériles (las necesarias de acuerdo con el número de diluciones)
* Pipetas Pasteur estériles
* 44 cajas Petri estériles, de 15 x 100 mm. A
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