Determinacion de gluocosa en sangre

| Laboratorio de Bioquímica, 25 de Mayo de 2011 | |
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE
Zayda Fonseca Cobos Cód. 2080107. Elizabeth González Mateus, Cód. 2071750
Presentado a: Profesor Herminsul Cano

INTRODUCCIÓN
La glucosa es la principal fuente de energía de los seres vivos. Por esta razón es un metabolito fundamental de los procesos biológicos. Su determinación en sangre ha sidodesde hace mucho tiempo un proceso de rutina en laboratorio clínico. Su importancia médica de este test radica que a niveles sanguíneos alterados pueden ser signo de una enfermedad metabólica muy común conocida como diabetes mellitus.
En el laboratorio se analizaron muestras de sangre de pacientes (estudiantes) que no habian hecho ningún tipo de dieta antes de la toma de la muestra de sangre, conestas muestras se realizó un sencillo procedimiento utilizando la técnica espectroscopia de absorción en UV-VIS utilizando patrón certificado. La metodología y los resultados obtenidos se presentan en el presente informe.
FUNDAMENTO DEL METODO
Como se muestra en las siguientes reacciones, la glucosa presente en la muestra origina un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotométrica:Glucosa+ 12 O2 +H2O → Ac. Glucónico+ H2O2 catalizada con glucosa oxidasa (1) 2H2O2+4-Aminoantipirina+fenol→Quinonaimina+ 4H2O cat.con peroxidasa (2)
En la ecuación (1) se muestra la reacción de oxidación de la glucosa para producir acido gluconico, esto por la acción de la glucosa oxidasa. En la ecuación (2) se muestra la oxidación del cromógeno 4- aminoantipirina/fenolconviertirndolo en un compuesto de color rojo que absorbe radiación entre 492 y 550 nm, con un pico de máxima absorbancia en 500nm.
MATERIALES Y EQUIPOS

* Pipeta
* Espectrofotómetro
* Centrifuga
* Tubos de ensayo
* Muestras de sangre (4mL)
* Reactivo SERA-PAK PLUS: fosfatos 70 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa >10 U/mL, peroxidasa > 1 U/mL, 4-aminoantipiridina 0,4mmol/L, pH 7,5.
* Patrón de Glucosa/urea/creatinina: Glucosa 100 mg/Dl (5,55 mmol/L), urea 50 mg/L, creatinina 2 mg/dL. Patrón primario acuoso.

DESARROLLO ESPERIMENTAL

RESULTADOS
Los resultados de la absorbacia se registraron en la siguiente tabla:
Tabla 1. Valores de absorbancia medidos a una
longitud de onda iguala: λ=500nm
Tubo | Blanco | Patrón | Muestra |
Reactivo | 2 ml | 3 mL | 2 mL |
Agua destilada | 20µL | - | - |
Estándar | - | 20 µL | - |
Muestra | - | - | 20 µL |
Absorbacia | 0 | 0.336 | 0.556 |

Para calcular la concentración de glucosa en la muestra se realizaron los siguientes cálculos:
AmuestraApatrón*Cpatrón = Cmuestra = 0.5560.336*100mgdL = 165.47mgdL

MÉTODO POR CURVADE CALIBRACIÓN
La longitud de onda a la cual se realizaron las mediciones fue: 500 nm
Muestra | Absorbancia |
Blanco | 0 |
Patrón | 0.336 |
Muestra 1 | 0.556 |
Muestra 2 | 0.289 |

A partir de los datos de la tabla 1 se puede realizar una curva de calibración utilizando como referencia el blanco y la muestra patrón que tienen concentración conocida de 5.5 mmol/litro.

La graficaanterior solo está compuesta por dos puntos, además la máxima absorbancia es de 0.336 por tanto sería necesario descartar la muestra numero 1, ya que no cae dentro del rango conocido de linealidad. Sin embargo se realizara el análisis para la muestra 1 advirtiendo que esta se sale del rango de linealidad respecto a la concentración de la muestra patrón.

Curva de calibración
A=0.0611 +6*10-17Donde A es la absorbancia medida y [ ] es la concentración de glucosa de cada sustancia.
Determinación de concentración de glucosa.
Peso molecular glucosa: 180 g/mol
Muestra 1
A=0.556
=A0.0611
=0.5560.0611=9.10 mmolar
9.10mmollitro*1 litro10 decilitros*1 mol 1000 mmoles*180000 mg1 mol =163.8 mg/dL
Muestra 2
A= 0.289
=0.2890.0611=4.73 mmolar
4.73mmollitro*1 litro10 decilitros*1...