El microscopio. técnicas microscópicas

TEMA 25:
EL MICROSCOPIO. TÉCNICAS MICROSCÓPICAS EN EL LABORATORIO DE CITOLOGÍA

1. INTRODUCCIÓN
Llamamos microscopio a todo instrumento óptico capaz de producir imágenes ampliadas de objetos pequeños.
El campo visual va desde el observador hasta el objeto en cuestión. Se puede alejar o acercar, pero existe un límite que corresponde a la deformación máxima del cristalino del ojo. Todoobjeto situado a una distancia del ojo inferior a este punto no puede verse con claridad.
Si entre el ojo y el objeto ponemos un sistema óptico capaz de aumentar el ángulo visual, aquel se verá con mayor claridad y sin fatiga, permitiendo observar detalles no perceptibles a simple vista.
2. MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO CLARO
Es un tubo provisto de 2 lentes, una en cada extremo que amplíansucesivamente la imagen del objeto el cual está intensamente iluminado. De las 2 lentes, una se encuentra próxima al objeto y se denomina lente objetivo; la otra lente se sitúa junto al ojo del observador y recibe el nombre de lente ocular. Además, existen lentes intermedias que multiplican los aumentos y otros dispositivos como el condensador, que concentran la luz emitida por la fuente luminosa delobjeto.
Lo importante del microscopio no son los aumentos en si mismo, sino el poder de resolución, que es la capacidad de distinguir como imágenes distintas 2 puntos cercanos. El poder de resolución se define como la inversa del límite de resolución, que se calcula con la fórmula de Abbe.
3. MODALIDADES DE MICROSCOPÍA ÓPTICA.
Para estudiar el material vivo, en el que no pueden aplicarse lastinciones convencionales pues las células mueren tras la fijación, se emplea el microscopio de contraste de fases, el cual aprovecha las diferencias de amplitud y los retardos de las longitudes de onda que atraviesan la muestra y las concierte en diferencias de brillo o intensidad.
El microscopio de interferencia es una variante del microscopio de contraste de fases, pero tiene la ventaja deproporcionar resultados cuantitativos. Se pueden calcular cambios en el índice de refracción y las variaciones de fase se pueden reflejar en cambios de color tan acentuados que una célula viviente es capaz de aparecer coloreada.
El microscopio de polarización se basa en la propiedad de ciertas sustancias (anisótropas) que tiene diferente índice de refracción según la dirección que se considere. Estapropiedad es utilizada mediante un dispositivo de polarización, que se aplica al microscopio para apreciar estas diferencias como diferencias de contraste entre las diversas sustancias.
El microscopio de fluorescencia incorpora una lámpara que actúa excitando el fluorocromo, y un filtro especial, que presenta altos valores de transmisión para las ondas emitidas por el colorante fluorescente.4. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Un microscopio electrónico es aquél que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 2 aumentos comparados con los de los mejores microscopios ópticos) debido a que la longitud de onda de loselectrones es mucho menor que la de los fotones "visibles".
Los microscopios electrónicos sólo pueden ofrecer imágenes en blanco y negro puesto que no utilizan la luz.
5.1. Microscopio electrónico de transmisión
Es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda dela luz visible. Lo característico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.
Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
Utilizan haces de electrones que chocan contra el objeto que se desea observar. Posteriormente, los electrones impactan contra una...