Electroforesis

Índice

Introducción..................................................................................................1
Fundamento de las separaciones electroforéticas ........................................1
Factores que afectan la electroforesis............................................................2
Tipos deelectroforesis...................................................................................3Métodos electroforeticos zonales: métodos más utilizados..........................3
Electroforesis en gel de poliacrilamida.........................................................3
Electroforesis en geles de gradientes............................................................4
Electroforesis en geles deagarosa................................................................4
Electroforesis capilar. …..............................................................................5
Fuentes de error en la electroforesis ............................................................5
Bibliografía y webgrafía...............................................................................5

Introducción

Electroforesis

Electroforesis es una técnica delaboratorio empleada para la separación analítica de moléculas biológicas según su tamaño y carga empleando un campo eléctrico. Es una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular. La separación se puede realizar sobre varios medios; superficie hidratada de un soporte sólido como papel o acetato de celulosa, sobre una matriz porosa como gel, o en disolución, y dependiendo de la técnicautilizada la separación se realiza de forma distinta de acuerdo a la carga y masa de la molécula analizada.
Fue empleado por primera vez por el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius , impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asigno a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo desoporte; aunque este término se limito originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscopicas , se ha convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular.

Fundamento de las separaciones electroforéticas

Sabemos que tanto macromoléculas y electrolitos, están cargadas eléctricamente y dependiendo de la constante de ionización de sus gruposácido-básico, se clasifican en débiles o fuertes. La técnica se utiliza para conocer el carácter de la molécula lo cual se determinara por la velocidad con la que se mueve en un campo eléctrico. En el caso de proteínas, se puede determinar la masa molecular o detectar cambios en los aminoácidos; separar distintas especies moleculares. Para la separación de las especies a analizar, se genera un campoeléctrico para la molécula puesta en un líquido portador. Al generar el campo, habrá una intensidad pasando constantemente del polo positivo al negativo, lo que quiere decir que actuará una fuerza sobre la molécula la cual experimentará una aceleración donde se obtendrá una velocidad que se neutralizara por la viscosidad del medio.

La velocidad que obtiene a molécula depende de la carga de lamolécula, la intensidad de corriente eléctrica que apliquemos, del radio (tamaño) de la molécula y la viscosidad del medio donde esta inserta.
La movilidad molecular, refleja la velocidad relativa a la fuerza del campo y depende de la carga de la partícula que, a su vez, depende del pH del medio en el que se encuentre. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado paradeterminar la movilidad.

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son depositadas en un campo eléctrico, éstas, experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta. Al transcurrir un periodo de tiempo, las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (polo negativo) y aquellas cargadas negativamente se desplazaran hacia el ánodo (el...