Electroforesis

15. Electroforesis: electroforesis en papel de proteínas séricas
Isaac Túnez Fiñana
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Córdoba, Avda. Menéndez Pidal s/n, 14004-Córdoba

RESUMEN

La electroforesis consiste en la separación de partículas aprovechando su traslado mediante la aplicación de campos eléctricos. La capacidad de movimiento de lasdiferentes moléculas depende de la intensidad del campo aplicado, su carga y su peso molecular. Existen diferentes tipos, que se engloban en dos: libre o de frente móvil y de zona. El objetivo será clarificar los conceptos con ella relacionados, la metodología y práctica de la electroforesis en papel, así como su relevancia en el estudio de las proteínas séricas. Palabras Clave: acetato de celulosa,electroforesis, movilidad electroforética, proteínas séricas. Abreviaturas empleadas. PAGE: electroforesis en gel de poliacrilamida; SDSPAGE: electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida; SDS: dodecil sulfato sódico

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS Se denomina electroforesis al transporte de partículas en un campo eléctrico. Cualquier ión o molécula cargada eléctricamente migrará cuandose someta a la acción de un campo eléctrico. A un pH determinado, muchas moléculas biológicas poseen carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH y composición del medio en que se encuentren. Con técnicas electroforéticas, es posible separar los diferentes componentes de una mezcla de aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos y otras biomoléculas cargadas. En el laboratorio clínico, la aplicaciónmás importante de la electroforesis es la separación de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso. 1.2. Movilidadelectroforética Si se aplica un campo eléctrico a una mezcla de moléculas cargadas, éstas migrarán al electrodo de polaridad opuesta. Cuando una molécula de carga q se encuentra en un campo eléctrico de magnitud E, la fuerza que provoca la
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aceleración de la partícula será qE. Dicha fuerza se verá contrarrestada por la resistencia friccional f dando una velocidad resultante v, de forma que: qE= fv Aplicando las leyes de Stokes para una molécula esférica de radio r que se mueva a través de un medio de viscosidad n, se cumple: f= 6 nr A partir de las anteriores expresiones se obtiene: qE= 6nrv La movilidad electroforética V de una molécula se define como la migración por unidad de campo de fuerza, de modo que: V=v/E=q/f= q/6 nr Por tanto, la movilidad electroforética depende de la cargade las partículas y del coeficiente de fricción f, que es dependiente del tamaño de la molécula, de su forma y de la viscosidad del medio. 1.3. Tipos de electroforesis 1.3.1. Electroforesis de frente móvil o libre Las sustancias a separar se introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica adecuados. Se colocan dos electrodos en sendos brazos del dispositivo,entre los que se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de proteína cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta. Las diferentes proteínas se desplazan a velocidades diferentes de acuerdo con sus cargas y coeficientes de fricción respectivos, formándose nubes (o frentes) que se desplazan en la disolución tampón. Este desplazamiento puede seguirse con diversos sistemasópticos que ponen de manifiesto las sustancias según se van separando. Para impedir la mezcla por convección de las proteínas que emigran se necesita un sofisticado aparato y a su vez se precisa el empleo de muestras muy grandes. Esta es la razón por la que la electroforesis de frente móvil ha sido sustituida por la electroforesis de zona. 1.3.2. Electroforesis de zona En esta técnica, la muestra...