Estudiante

Practica ## 4 Enzimas
OBJETIVOS:
 Demostrar la forma en que una enzima es específica para cierto sustrato.  Discutir cómo diferentes factores pueden alterar la actividad enzimática.
 Determinar la presencia de enzimas y sus propiedades como catalizadores proteicos en diferentes reacciones de sustancias experimentales en laboratorio.
MATERIALES:
Laboratorio: Beakers, tubos de ensayopequeños, baño Maria, gradilla, vidrio de reloj, cajas de petri, pinzas para tubos de ensayo, papel absorbente, estufa, termómetro, probetas, pipetas, balanza analítica, mortero, algodón. Cuchilla o bisturí, pitillos plástico, varias jeringas (1 y 10 ml), cucharas desechables.
Reactivos: Solución de almidón, solución de lugol, agua destilada, cloruro férrico (en cristales), ácido acético, hidróxido desodio o amoniaco, anticoagulante (citrato de sodio), Benedict, MNO2, Agua oxigenada, agua en bolsa, levadura y hielo
Biológico: Saliva, un trozo de higado (1 lb), un trozo de riñón, papa, zanahoria, remolacha, sangre fresca, levadura.
RESULTADOS:
1. Acción de la invertasa:
Se tomaron 3 g de levadura, que anteriormente se había vuelto polvo, y la disolvieron en 40 ml de agua destilada, tomandoel agua una coloración crema; se dejó en reposo por 20 minutos, se envaso en 6 tubos de ensayo, 15 ml a cada uno, y fue llevada a la centrifugadora o decante. De esta manera, se extrajo la enzima invertasa, que taba en la parte superior de los tubos, porque en estos se realizaron dos fases; ese líquido fue pasado a un beaker.
A los 6 tubos de ensayo se le adiciono 5 ml del extracto de levaduraobtenido anteriormente, adicionaron 10 ml de solución de sacarosa al 2% a cada uno.
Se dejaron dos tubos a temperatura ambiente, dos se hicieron enfriar y dos se calentaron; dejaron enfriar y determinaron glucosa con Benedict a los 30 minutos, por el benedit tomaron cada tubo una coloración azul cielo; luego que se llevaron al fuego todos los tubos por 10 minutos hasta que tomaron un colorsalmoncito cada uno; los primeros fueron los de temperatura caliente, los segundo de temperatura ambiente y los últimos fueron los del frio, dando como resultado que todos tuvieron una reacción favorable en la determinación de glucosa.
Reacción Enzimática
Figura 1: el tubo de que fue llevado primero al calor obtuvo un tono del color salmón más fuerte, el de temperatura ambiente tuvo un tono medio y eldel frio un tono más claro.
2. Se rotularon y prepararon 4 tubos de ensayo de la siguiente manera:
A fin de observar como reaccionaban las sustancias ante el peróxido de hidrogeno, para ver como esto afectaría su actividad enzimática. Los resultados obtenidos fueron: Los 4ml de hígado + 2ml de H2O2 reaccionaron más rápido y la espuma salió del tubo con rapidez. Los tubos 2 y 3 reaccionaronposteriormente con menos velocidad y su espuma permaneció más tiempo en el tubo de ensayo. El tubo 1 no reaccionó ese era el blanco.
Figura 2: reacción del hígado con el peróxido de hidrogeno.
3. Se rotularon y prepararon 5 tubos de ensayo de la siguiente manera:
Posteriormente se adiciono peróxido de hidrógeno de la siguiente forma: Tubo No 1 - 0ml Tubo No 2 – 1ml Tubo No 3 – 2ml Tubo No 4 – 4ml TuboNo 5 – 6ml Se observo el comportamiento siguiente; en el tubo 2 la reacción fue rápida y completa, la espuma de la reacción no logro salir del tubo. En los 3 últimos tubos la reacción fue mucho más rápida,aun así la mayor velocidad de reacción se presento en el tubo número 5.
Número del tubo
Mililitros (ml) de extracto de hígado 1 0
2
1.0ml 3 2.0ml
4
4.0ml
Número del tubo
Mililitros (ml)de extracto de hígado 1 1.0ml
2
1.0ml 3 1.0ml
4
1.0ml 5 1.0ml
Reacción Enzimática
Figura 3: reacción enzimática entre el peróxido de hidrogeno a distinta cantidad y a una misma cantidad de hígado.
4. Se prepararon y rotularon 3 tubos con las siguientes instrucciones.
Después de aplicados los procedimientos mencionados se espero a que los tubos estuvieran a temperatura ambiente y se pudo...