Extraccion Y Purificación De Lipidos Complejos
Páginas: 6 (1362 palabras)
Publicado: 22 de mayo de 2012
EXPERIMENTO 11
EXTRACCION Y PURIFICACION DE LIPIDOS COMPLEJOS
REQUISITOS Repasar los conceptos vistos en teoría sobre los lípidos complejos, función, nomenclatura, propiedades químicas y físicas, distribución en nuestro organismo 1. FUNDAMENTOS
OBJETIVOS Comprobar la presencia de los lípidos complejos en cerebro de res o de ratas una vez efectuada su extracción por diferentes solvente yposterior fraccionamiento de los extractos.
El tejido adiposo esta constituido principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro contiene relativamente pocas, los constituyentes lipídicos de estos tejidos son los lípidos complejos como: fosfolípidos y colesterol. Basados en la solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, es posible extraer y purificar lípidos del cerebro porsucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles, glicerofosfolípidos y esfingolípidos. El esquema se basa en los siguientes hechos: • • • Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lípidos complejos. Algunos glicerofosfolípidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y lafosfatidilserina, son solubles en éter e insolubles en acetona. Los fosfátidos y glucósidos de esfingosina, se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en acetona y éter.
Los productos finales de éste experimento son sustancias de una pureza relativa, y serán identificados una vez efectuadas las extracciones. 129
2.
MATERIALES Y MÉTODOS Alcohol de 95 % Cloroformo-metanol (1:1) Ácidosulfúrico. α-Naftol al 5 % en etanol. Anhídrido acético. Ácido nítrico. Molibdato de amonio, Carbonato de sodio al 2 %. Nitrato de potasio al 2 %.
2.1 Materiales Homogeneizador (o una licuadora) Sistema de destilación. Plancha eléctrica o mechero. Balanza. Matraz. Pipetas. Embudo de Büchner. Balones. 50 g de cerebro de res o de rata. Éter etílico. Acetona. 2.2 Métodos PRECAUCION: Muchos de losdisolventes utilizados en las operaciones siguientes son muy inflamables. NO PUEDE USARSE, bajo ningún concepto una llama directa de mechero, emplee baño de vapor. 2.2.1 Extracciones y obtención de las fracciones 2.2.1.1 Preparación de la fracción 1: Colesterol. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Pese 50 g aproximadamente de cerebro y coloque en el homogeneizador con 200 ml de acetona. Homogeneice por 1 min. ytransfiera a un vaso de precipitado, lavando el recipiente del homogeneizador con 25 ml de acetona vertiendo el lavado en el vaso con la suspensión. Deje en reposo 5 min. agitando ocasionalmente. Filtre en un embudo de Büchner y homogeneice el residuo durante 1 min. con 100 ml de acetona, lave con 50 ml de acetona que verterá sobre el residuo, esto constituye la fracción 1. Guarde los residuos de lafiltración para preparar las fracciones 2 y 3. Evapore la acetona en un matraz de fondo redondo calentando a vapor y con la cabeza de destilación conectada a la trompa de agua. Enfríe la solución al chorro y recoja el colesterol bruto en un embudo de Büchner.
130
8.
Recristalice el colesterol disolviéndolo en una mínima cantidad de etanol caliente, filtrando la solución todavía calientey dejando enfriar el filtrado, la filtración se efectúa sobre un filtro plegado colocado sobre un embudo encima de una fiola, la fiola debe estar a BM. Deje hervir el filtrado hasta que el alcohol se evapore. Seque el colesterol cristalizado al aire, pese y guarde para su posterior identificación.
9. 11.
2.2.1.2 Preparación de la fracción 2: Lecitina y Cefalina 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.Transfiera el residuo que queda sobre el papel de filtro (insoluble en acetona) a un vaso de 400 ml y extraiga tres veces con éter, utilizando 200 ml cada vez. Para hacer las extracciones, se deja el producto sólido en éter 4-5 min., agitando de vez en cuando. Se filtra el producto al vació y se guarda el residuo para el aislar la fracción 3. Concentre los extractos etéreos, hasta un volumen de 50...
EXTRACCION Y PURIFICACION DE LIPIDOS COMPLEJOS
REQUISITOS Repasar los conceptos vistos en teoría sobre los lípidos complejos, función, nomenclatura, propiedades químicas y físicas, distribución en nuestro organismo 1. FUNDAMENTOS
OBJETIVOS Comprobar la presencia de los lípidos complejos en cerebro de res o de ratas una vez efectuada su extracción por diferentes solvente yposterior fraccionamiento de los extractos.
El tejido adiposo esta constituido principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro contiene relativamente pocas, los constituyentes lipídicos de estos tejidos son los lípidos complejos como: fosfolípidos y colesterol. Basados en la solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, es posible extraer y purificar lípidos del cerebro porsucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles, glicerofosfolípidos y esfingolípidos. El esquema se basa en los siguientes hechos: • • • Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lípidos complejos. Algunos glicerofosfolípidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y lafosfatidilserina, son solubles en éter e insolubles en acetona. Los fosfátidos y glucósidos de esfingosina, se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en acetona y éter.
Los productos finales de éste experimento son sustancias de una pureza relativa, y serán identificados una vez efectuadas las extracciones. 129
2.
MATERIALES Y MÉTODOS Alcohol de 95 % Cloroformo-metanol (1:1) Ácidosulfúrico. α-Naftol al 5 % en etanol. Anhídrido acético. Ácido nítrico. Molibdato de amonio, Carbonato de sodio al 2 %. Nitrato de potasio al 2 %.
2.1 Materiales Homogeneizador (o una licuadora) Sistema de destilación. Plancha eléctrica o mechero. Balanza. Matraz. Pipetas. Embudo de Büchner. Balones. 50 g de cerebro de res o de rata. Éter etílico. Acetona. 2.2 Métodos PRECAUCION: Muchos de losdisolventes utilizados en las operaciones siguientes son muy inflamables. NO PUEDE USARSE, bajo ningún concepto una llama directa de mechero, emplee baño de vapor. 2.2.1 Extracciones y obtención de las fracciones 2.2.1.1 Preparación de la fracción 1: Colesterol. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Pese 50 g aproximadamente de cerebro y coloque en el homogeneizador con 200 ml de acetona. Homogeneice por 1 min. ytransfiera a un vaso de precipitado, lavando el recipiente del homogeneizador con 25 ml de acetona vertiendo el lavado en el vaso con la suspensión. Deje en reposo 5 min. agitando ocasionalmente. Filtre en un embudo de Büchner y homogeneice el residuo durante 1 min. con 100 ml de acetona, lave con 50 ml de acetona que verterá sobre el residuo, esto constituye la fracción 1. Guarde los residuos de lafiltración para preparar las fracciones 2 y 3. Evapore la acetona en un matraz de fondo redondo calentando a vapor y con la cabeza de destilación conectada a la trompa de agua. Enfríe la solución al chorro y recoja el colesterol bruto en un embudo de Büchner.
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8.
Recristalice el colesterol disolviéndolo en una mínima cantidad de etanol caliente, filtrando la solución todavía calientey dejando enfriar el filtrado, la filtración se efectúa sobre un filtro plegado colocado sobre un embudo encima de una fiola, la fiola debe estar a BM. Deje hervir el filtrado hasta que el alcohol se evapore. Seque el colesterol cristalizado al aire, pese y guarde para su posterior identificación.
9. 11.
2.2.1.2 Preparación de la fracción 2: Lecitina y Cefalina 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.Transfiera el residuo que queda sobre el papel de filtro (insoluble en acetona) a un vaso de 400 ml y extraiga tres veces con éter, utilizando 200 ml cada vez. Para hacer las extracciones, se deja el producto sólido en éter 4-5 min., agitando de vez en cuando. Se filtra el producto al vació y se guarda el residuo para el aislar la fracción 3. Concentre los extractos etéreos, hasta un volumen de 50...
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