Farmacia

Ensayos farmacológicos in vitro para evaluar actividad antigiardiÁsica
Marta Guerra Ordóñez1
Resumen
Se realizó una revisión sobre los ensayos farmacológicos in vitro más empleados para evaluar la actividad antigiardiásica. Los primeros ensayos de susceptibilidad a drogas conllevaban a una tediosa observación microscópica del efecto de la droga sobre la motilidad y la morfología delparásito; tradicionalmente se ha empleado el método de inhibición de crecimiento mediante conteo visual. Un ensayo posterior de crecimiento clonal elimina este inconveniente pero es técnicamente demandado. Mas recientemente se destacan el ensayo radiométrico, basado en la incorporación de la timidina titriada, el de inhibición de adherencia de los trofozoítos y un ensayo colorimétrico que emplea sales detetrazolio, las cuales son metabólicamente reducidas en las células vivas para dar lugar a un producto coloreado. Cada uno de estos ensayos posee ventajas y desventajas; la tendencia actual está en desarrollar y combinar métodos que posibiliten obtener información acerca del mecanismo de acción de las drogas.
DeCs: RESISTENCIA A LAS DROGAS; GIARDIASIS/quimioterapia; GIARDIA LAMBLIA/efectos dedrogas; GIARDIA LAMBLIA/aislamiento & purificación; AGENTES ANTIPARASITARIOS; "IN VITRO"; TEST DE SENSIBILIDAD MICROBIANA.
Diversos factores pueden contribuir a la ineficiencia de un tratamiento, entre ellos la existencia de cepas resistentes. Algunos estudios indican que la resistencia a drogas en Giardia lamblia puede ser responsable de la recurrencia de esta parasitosis, por ello es necesariala búsqueda de nuevos compuestos o la introducción de otros ya existentes.
El uso de técnicas in vitro para el estudio de la sensibilidad de G. lamblia a las drogas ofrece ciertas ventajas. Primero, puede ser evaluada la actividad antigiar-diósica de gran número de muestras, segundo, un mejor entendimiento del modo de acción de las drogas en condiciones controladas de ensayos. Finalmente, puedenser monitoreados de forma emergente aislamientos clínicos de pacientes que no responden al tratamiento.
Métodos para evaluar actividad antigiardiósica in vitro
El desarrollo de un medio de cultivo apropiado para Giardia intestinalis abrió las posibilidades del estudio de la respuesta de los parásitos a las drogas. Entre los primeros reportes, Diamond y Bartgis describen un ensayosemicuantitativo de viabilidad para evaluar el efecto de drogas, por conteo de parásitos sobrevivientes in situ. Cuando se observaban al microscopio invertido (x 100) 50 parásitos por campo, eran contados 5 campos, si se observaban menos, 10 campos. Era calculado el porcentaje de viabilidad si la morfología, adherencia y motilidad eran normales. Este método se propuso adecuado para una selección inicial dedrogas, sin embargo, no presentó diferencias cuantitativas (menores que 20 %) en el efecto de varios antibióticos sobre el crecimiento.1 Catorce años después, se procede de forma similar para evaluar la tolerancia de un cultivo axénico de G. lamblia a diferentes agentes antimicrobianos y se alcanzan resultados de susceptibilidad similares a los obtenidos con ensayos posteriores de microscopia oformación de colonias.2
Era necesario eliminar el empleo de métodos laboriosos o subcultivos.3 Dos acercamientos a los ensayos in vitro de drogas contra G. lamblia incluyen a Jokipii L y Jokipii AM en 1980, los cuales incuban trofozoítos directamente extraídos de duodeno. La viabilidad fue determinada por examen microscópico de los organismos, por el movimiento flagelar.4 Al menos 100 trofozoítos sonexaminados microscópicamente (x 400) para evidenciar motilidad, el movimiento es observado durante 10 s, especialmente el del flagelo ventral, clasificándose no mótil aun cuando morfológicamente pudiera parecer normal. Claro que esta técnica no tenía en cuenta que los organismos podían ser reproductivamente no viables aunque mostraran actividad flagelar. Se mostró la actividad in vitro del...