Identificacion aminoacidos

EXPERIMENTO 2

METODOS CUANTITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

REQUISITOS Repasar las estructuras de los 20 L-α aminoácidos (AA), que forman las proteínas y las características de las proteínas.

OBJETIVOS Identificar por métodos colorimetritos los 20 L-α aminoácidos (AA), que forman las proteínas, basados en las reacciones de los grupos R

1. FUNDAMENTOS Por laestructura peptídica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las proteínas pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos coloreados. Estas reacciones son la base para la determinación cuantitativa y cualitativa de las proteínas. Por presentarse variaciones en la composición de los aminoácidos de las diferentes proteínas, se manifiestan diferentes colores y grados deintensidad para una misma reacción, íntimamente relacionado con la naturaleza de la proteína analizada. 1.1 1.1.1 Fundamentos químicos de las pruebas. Prueba de la ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo oamarillo. Debido a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica, aparentemente debido a una oxidación y reducción intramolecular de la ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un colorrojo que pasa rápidamente a amarillo. La reacción se muestra en la figura 1 27

Figura 1 Reacción de la prueba de la ninhidrina
CO C CO OH R + H H C OOH Ninhidrina 2 H 2O Aminoácido N CH

OH

CO C CO N

R CH C OOH

CO C CO

H N

R C C OOH

(BASE DE SCHIFF) R CO C CO N H2 H
+

C H

H 2O O C O2

(2-amino-1,3-dicetohidrindeno)

CO C CO Ninhidrina

CO H + NH2 2 H2O CO COH OH

(2-amino-1,3-dicetohidrindeno)

CO C HN CO C

OC OC

(Ninhidrina-dicetohidrindeno) color violeta

1.1.2

Prueba de Biuret

Es una prueba general para polipéptidos y proteínas ya que sirve para reconocer las uniones peptidicas. La positividad se manifiesta por la aparición de una coloración violeta. La formación de un complejo de coordinación entre los cationes cúpricos enmedio alcalino con las uniones peptídicas. 28

Figura 2 Reacción de la prueba de Biuret

OH CO NH CO NH 2 OH
1.1.3 Prueba de coagulación:

OH Cu NH2 HN K K
2H N

NH2

CO

OC

OH

Es una prueba para identificar: albúminas, globulinas, glutelinas y prolaminas. La positividad se manifiesta por la formación de un coágulo. No se conoce exactamente el mecanismo de reacción, se cree queocurre cierta deshidratación de la molécula proteica. 1.1.4 Prueba de Sulfato de amonio: Las proteínas, como otros coloide son precipitadas por soluciones concentradas de sales de amonio[NaCl. (NH4)2SO4 y NaSO4 ]. Aparentemente la precipitación se debe a la neutralización y deshidratación de la molécula, seguida de agregación y precipitación. 1.1.5 Prueba xantoprotica: Es una reacción que reconocelos aminoácidos que poseen el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos. 1.1.6 Prueba de los grupos SH:

Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que loscontiene, se reconocen por la formación de una coloración negra o gris. La figura siguiente muestra dicha reacción. 29

Figura 3. Reacción de la prueba de los grupos SH

CH2 CHNH2 COOH

S

CH2 CHNH2 COOH 2 NaOH

CH2OH CHNH2 SNa2 + COOH (Serina

(Lanteonina) O SNa2 + H3C H3C C O O O Pb

SPb + 2 CH3COONa

C

(Acetato de plomo)
1.1.7

(Negro)

Prueba de Sakaguchi:

Es una...