Informe bioquimica

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FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES LABORATORIO BIOQUÍMICA Alumno: _______________________________________ Código: _________ Alumno: _______________________________________ Código: _________
Práctica 1: EMPLEO DE MICROPIPETAS, ESPECTROFOTÓMETRO Y PREPARACIÓN DE DILUCIONES.

OBJETIVOS:       Familiarizarse con el manejo de las micropipetas y el espectrofotómetro. Reconocer las aplicacionesdel uso de estos equipos en la práctica de laboratorio. Realizar adecuadamente la calibración de una micropipeta. Crear un espectro de absorción de un compuesto y hacer uso práctico de esta herramienta. Familiarizarse con la preparación de diluciones seriadas. Realizar curvas de calibración para determinar la concentración de soluciones.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO. 1.1 Uso de micropipetas. Enbioquímica, la habilidad que se tenga para realizar medidas exactas y reproductibles, al igual que para transferir pequeños volúmenes de líquidos, es de importancia fundamental en el momento de obtener resultados útiles. Para medir volúmenes de líquidos menores a 1 mL, el instrumento más utilizado es la micropipeta (pipeta serológica o pipeta semiautomática). Este tipo de pipetas se basa en un principiode desplazamiento de aire y en la utilización de puntas desechables. En la siguiente gráfica se muestran algunos modelos de micropipetas. Este tipo de equipos cubre amplio rango de volúmenes a medir (desde 0.1 μL hasta 5 mL). Antes de utilizar cualquier micropipeta lo primera que se debe establecer es el rango de volúmenes que es capaz de medir esa pipeta.

Figura 1. Micropipeta unicanal ymulticanal

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Las micropipetas se pueden clasificar de acuerdo con los rangos de volúmenes que utilizan, pero también de acuerdo con la capacidad de dispensar volúmenes simultáneos a la vez (pipeta multicanal), o un solo volumen (pipeta unicanal). En la tabla siguiente aparecen los rangos de volumen más comunes que presentan las diferentes micropipetas y el incremento de volumen de cada una. Tabla1. Rangos más comunes para diferentes micropipetas. VOLUMEN INCREMENTO RANGO (μL) DE VOLUMEN (μL) 0.1 – 2.5 0.05 0.5 - 10 0.1 2 - 20 0.5 5 - 50 0.5 10 - 100 1 20 - 200 1 50 - 200 1 100 - 1000 1 200 - 1000 5 1000 - 5000 50 No intente ajustar la micropipeta para volúmenes mayores al de su capacidad máxima, o para volúmenes menores de cero; si realiza dichos ajustes causará daño a la micropipeta.Partes de la micropipeta: dependiendo del fabricante las formas de algunas de las partes de las micropipetas pueden variar, pero en general todas las micropipetas cuentas con las siguientes partes:

Figura 2. Partes de una micropipeta

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Embolo y varilla de émbolo: selecciona el volumen a dispensar, para toma y dispensación del volumen establecido. Pantalla: establece el volumen que se estámidiendo Cono: sitio de inserción de puntas. Para el uso correcto de la micropipeta usted debe tener en cuenta los siguientes pasos: 1. Ajuste de volumen: el volumen de la micropipeta se muestra claramente en la pantalla situada en el mango. Para ajustar el volumen gire el embolo en dirección de las agujas del reloj o en contra (dependiendo si desea aumentar o disminuir). Tenga en cuenta que elvolumen deseado aparece tras el clic del embolo, todos los digitos deben estar completamente visibles en la pantalla, los volúmenes no deben estar situados por fuera del rango de la micropipeta que está utilizando. En algunas micropipetas se incluye un dispositivo de seguridad que debe utilizarse cuando el volumen ya ha sido establecido. 2. Inserción – expulsión de puntas: las puntas desechables que seutilizan dependen del tipo de micropipeta que se está utilizando; estas puntas se compran de acuerdo con la recomendación del fabricante, pero en general se ha aceptado un código de colores, en el cual las puntas transparentes sirven para las micropipetas de volúmenes menores (0.1-10 μL), las puntas amarillas para volúmenes intermedios (10 – 200 μL) y las puntas azules son para los volúmenes...