Ingeniero

Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Sesión nº 8 Características de los Sistemas Cualitativos de PCR Descritos en el Manual M. Querci y M. Mazzara

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Índice Sesión nº 8 Características de los Sistemas Cualitativos de PCR Descritos en el Manual

Características de los sistemas cualitativos de PCR descritos en el Manual PCR específica de plantas Detección del gen de la lectina Detección del gen de la zeína Método decribado: detección del promotor CaMV 35S y del terminador nos Detección del promotor CaMV 35S Detección del terminador nos PCR específica de OGM Detección específica del casete génico CTP/EPSPS en la soja Roundup Ready Detección del gen cryIA(b) sintético del maíz Bt-176 Detección específica del casete del promotor E35S / exón-intrón de hsp70 del maíz MON810 Bibliografía

3 3 3 3 4 5 5 7 7 7 9 11Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Sesión nº 8

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Características de los sistemas cualitativos de PCR descritos en el Manual
En este curso se utilizarán diferentes sistemas de detección: 1) se emplearán cebadores específicos de plantas para confirmar lapresencia y la calidad (capacidad de amplificación) del ADN extraído de las muestras; 2) el denominado «método de cribado», basado en la detección específica de las secuencias reguladoras más comunes, el promotor 35S y el terminador nos. Esos dos métodos se efectuarán con arreglo a un protocolo de PCR simple. Por último, se utilizarán cebadores específicos de OGM en «PCR anidada» para la detecciónselectiva y la identificación de las diferentes líneas transgénicas. El presente capítulo incluye una introducción sucinta de los diferentes sistemas utilizados para la detección y caracterización de la soja Roundup Ready, del maíz MON810 y del gen cryIA(b) del maíz Bt-176. Para más información sobre las secuencias y la composición de los cebadores, véase la Sesión nº 9.

PCR específica deplantas
Detección del gen de la lectina
Para la identificación del ADN de la soja, se utilizarán los cebadores GMO3 y GMO4 (Meyer et al., 1996), que amplifican un fragmento del gen de la lectina (Le1), específico de la soja. Como se ha indicado anteriormente, el objetivo es confirmar la presencia y la calidad del ADN extraído de las muestras que contienen soja, entendiéndose aquí por calidad del ADNsu capacidad de amplificación por la PCR. Los cebadores GMO3 y GMO4 se utilizan como PCR anidada para la segunda PCR-soja notificada por Meyer y Jaccaud (1997) sobre el ADN extraído de alimentos transformados. producto previsto es un amplicón de 118 pb. El

Detección del gen de la zeína

Los cebadores ZEIN3 y ZEIN4 (Studer et al., 1997) específicos del gen de la zeína en el caso del maíz (Ze1,codificación de una proteína de 10 kb) se utilizarán para confirmar la presencia y la calidad del ADN extraído de muestras que contienen

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maíz. Por lo que respecta al gen de la lectina, los cebadores ZEIN3y ZEIN4 se diseñaron en principio como cebadores internos (segunda ronda de PCR) en un sistema de PCR anidada para la detección de ADN de maíz extraído de alimentos transformados. Si el ADN diana extraído está presente, intacto y es amplificable, se prevé la amplificación de una banda de 277 pb.

Método de cribado: detección del promotor CaMV 35S y del terminador nos
La detección del promotor...