Inhibicion de la hemoaglutinacion

7.- Hemoaglutinación, inhibición
de la Hemoaglutinación, Hemoadsorción.
Instituto de Virología - C.I.C.V. - INTA

A. Hemoaglutinación
1. INTRODUCCION
Algunos virus poseen en su envoltura proyecciones cortas de una constitución química definida (glicoproteínas) denominadas hemoaglutininas. Estas tienen la propiedad de unirse a glóbulos rojos de ciertas especies animales, formando ensuspensión, un enrejado de glóbulos rojos-virus.
En los virus del grupo Orthomixovirus (Influenza humana) y Paramixovirus (Parainfluenza tipo 3) la ubicación de la enzima neuraminidasa entre las glicoproteínas virales, determina que en algunos virus (por ejemplo, Parainfluenza tipos 3) la técnica de hemoaglutinación debe realizarse a bajas temperaturas para retrasar la elución de los eritrocitos porla acción de la neuraminidasa.
La neuraminidasa actúa sobre la unión entre los glóbulos rojos y hemoaglutinina provocando la destrucción del sitio receptor específico en el glóbulo rojo con posterior elución del virus. Este fenómeno es visualizado en el fondo del pocillo de la policubeta por la formación de un pequeño botón rojo.
Los Adenovirus y Enterovirus son capaces de hemoaglutinar glóbulosrojos de ciertas especies, pero no poseen la enzima neurominidasa, por lo que la hemoaglutinación es irreversible. En otros virus, la hemoaglutinación está asociada a una fracción soluble del virus separable de la partícula viral (Poxvirus).
La característica principal de la técnica de hemoaglutinación es la rapidez, el bajo costo de los reactivos y la simplicidad de su realización, lo quedetermina su fácil adaptación a laboratorios de escasa infraestructura.
MATERIALES
2.1. Virus
Virus de Parainfluenza Bovina tipo 3 (PI-3) propagado en cultivo celular de riñón de feto bovino.
2.2. Diluyente
PBS, pH 7.2-7.4
2.3. Glóbulos rojos de origen bovino:
Obtenidos con asepcia, por punción yugular de un bovino joven y sin anticuerpos a PI-3. Se recogen en la soluciónAlsever diluidos en 1/3, agitando suavemente en forma circular . El volumen deberá ser doble de la cantidad de sangre a recoger. Mantener en heladera a 4ºC no más de 7 días. Para usar, lavar en PBS tres veces, centrifugando a 1800 rpm, durante 10 minutos. Diluir en PBS 1/4 (pudiéndose conservar a 4ºC) y diluir en el momento de uso 1 ml. de 1/4 en 29 ml de PBS (dilucíón final 1/120: 0.8%).

2.4.Otros materiales
Policubetas de fondo de U. microdiluidores y pipetas para gotas de 0,050 y 0,025 ml., papel sellador.
3. METODO
a. Colocar a lo largo de dos filas de la policubeta una gota de PBS de 0,05 ml., excepto en el primer orificio.
b. Colocar una gota de la suspención viral 0,050 ml en el primer y segundo orificio.
c. Hacer diluciones dobles en proporciones constantes conun microdiluidor de 0,05 ml., a partir del segundo orificio hasta el penúltimo.
d. Agregar 0,050 ml de glóbulos rojos de bovino, lavados y diluídos, en cada orificio.
e. Mezclar con cuidadoso balanceo, dejar a 4º C. Leer a las 4 horas.
4 INTERPRETACION
La última dilución en la que la hemoaglutinación es completa, se toma como punto final de actividad hemoaglutinante (HA),considerándose a la misma como que contienen una Unidad Hemoaglutinante (UHA). La recíproca de esta dilución expresa el número de Unidades Hemoaglutinantes o título del virus en UHA.
5 BIBLIOGRAFIA
Cunningham, C.H. "Laboratory Guide in Virology" 6th, Edition Burguess Pub.Co. 1966.
Guntaghson, G.A.; Erickson, G.A:; Cabrey, E.A: "Haemagglutination and Haemagglutination Inhibition Test with NewcasttleDisease Virus. Microtiter techniques. Serological Microtitration Techniques". U.S.D.A: APHIS. NSVL Iowa, May 1978.
Snyder, M.L.; Eernisse, K.A.; McKnight R.A:; Stewart, W.C. "Serologic Microtitration Techniques Manual". USDA APHIS. Vet. Services La. Ames 28-31, 1981.
Vannier, P.; Tillon, J.R. "Diagnostic de certitude de l'infection a Parvovirus dans les troubles de la reporction de l'espce...