Inmunofluorescencia: caracteristicas y ejemplos

Seminario de IFI Directa e indirecta - Aplicación clínica de Autoinmunidad
Seminario ELISA

Inmunofluorescencia

La inmunofluorescencia o técnica de anticuerpos fluorescentes es un procedimiento especializado que consiste en una reacción antígeno-anticuerpo hecha visible por la incorporación de un colorante fluorescente (isotiocianato de fluoresceína ó Tetrametil rodamina) alanticuerpo, y una vez hecha la reacción, se expone a la luz ultravioleta emitida por el microscopio para ser evidenciado por el fenómeno de fluorescencia.
El desarrollo de la IF precisa de un equipo que consta de un buen microscopio provisto de un condensador de campo oscuro, de una fuente luminosa especial con un bombillo de mercurio que produzca luz ultravioleta y de varios filtros específicos. Por lotanto, cada sistema está constituido por un filtro que suministra la luz a una cierta longitud de onda para excitar al fluorocromo y un segundo filtro barrera para excluir la luz excitante, que permite la transmisión de la iluminación fluorescente, de mayor longitud de onda. La fluorescencia alcanza la máxima excitación a 490nm y emite la luz fluorescente alrededor de 520 nm. Las lámparas másutilizadas para lograr una buena estimulación son las de tungsteno o de mercurio de alta presión.
Los microscopios equipados para la fluorescencia son de dos tipos principales: de luz transmitida y de luz incidente.
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Estas técnicas se aplican en la investigación de gran cantidad de microorganismos (bacterias, virus, hongos y parásitos) para lo que se usa la inmunofluorescencia directa,y en la determinación de anticuerpos específicos contra estos microorganismos se utiliza la inmunofluorescencia indirecta tiene mayor aplicación.
Aunque las formas directa o indirecta de IF son las más comunes, la inmunofluorescencia puede realizarse por inhibición de la unión Ag-Ac, o empleando las fracciones del complemento liberadas luego de la activación. Este procedimiento se usa poco en larutina.
- Ventajas de la inmunofluorescencia:
➢ La principal ventaja de ésta consiste en la rapidez con la que se obtienen los datos. En la mayor parte de los casos, el resultado puede ser dado el mismo día en que se toma la muestra.
➢ Los cultivos y las pruebas biológicas pueden ser omitidas.
➢ Pequeñas cantidades de organismos o Ags se encuentran fácilmente, aún en muestrasmuy contaminadas.
➢ En estos procedimientos no es necesaria la esterilidad.
➢ La posibilidad de dar un diagnóstico correcto, aun con organismos no viables (no aptos para cultivo), es alta.
➢ La inmunofluorescencia se usa no sólo en la identificación de los microorganismos, sino también en muchos otros estudios relacionados con la inmunología.
- Desventajas de lainmunofluorescencia:
➢ El costo del equipo y los reactivos es alto. Sin embargo una vez establecidos estos métodos en forma rutinaria, el ahorro de tiempo y material recompensa el gasto inicial.
➢ Requiere de personal especializado y debidamente entrenado.
➢ Como cualquier otra técnica serológica, los resultados no son 100% específicos, pero como todas ellas, son una ayuda efectiva para eldiagnóstico.
➢ Para una mejor compresión del tema, damos enseguida esquemas de la preparación del material necesario en las técnicas directas e indirectas.

❖ Inmunofluorescencia directa:
Es útil para hallar antígenos directamente en la muestra, para lo cual emplea anticuerpos de gran especifidad contra el determinante antigénico que se va a estudiar, marcados con la sustancia fluorescente.Otra aplicación que tiene es la determinación de linfocitos y sus subpoblaciones que, en la mayoría de los casos, utiliza Acs monoclonales marcados

❖ Inmunofluorescencia Indirecta:
Su utilidad consiste en encontrar la presencia de anticuerpos específicos contra un determinado microorganismos. Este puede ser del tipo M, G y A, y se evidencia mediante un anti-anticuerpo marcado con la...