Inmunofluorescencia

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Franco Cardoza, Yuliet Reseña de "LA MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y SU APLICACIÓN EN EL DIAGNÓSTICO DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS" Fitosanidad, vol. 9, núm. 3, septiembre, 2005, pp. 65-68 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal Ciudad de La Habana, Cuba
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Fitosanidad ISSN (Versión impresa): 1562-3009 nhernandez@inisav.cu Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal Cuba

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www.redalyc.org Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abiertoFITOSANIDAD vol. 9, no. 3, septiembre 2005

Reseña

LA MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y SU APLICACIÓN EN EL DIAGNÓSTICO DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS
Yuliet Franco Cardoza Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, c.e.: mstefanova@inisav.cu

INTRODUCCIÓN

La microscopía de fluorescencia se basa en los mismos
principiosde óptica de la microscopía común, con diferencias en el manejo y el diseño relacionadas con la generación y transmisión de longitudes de onda adecuadas a los fluorocromos que se quieren visualizar, ya sean propios de la muestra o de la coloración utilizada [Anónimo 1, 2003]. Los procesos de excitación generalmente requieren longitudes de onda cortas en el UV cercano (lámpara de halógeno-cuarzo,arcos de mercurio, etc.). El objetivo que suele utilizarse es el de inmersión en aceite, ya que produce una mayor ampliación. El aceite de inmersión proporciona un medio óptico homogéneo al paso de la luz entre la preparación y el lente frontal del objetivo [Anónimo 3, 2003]. La técnica serológica de fluorescencia fue introducida en 1947 por Coons con el empleo de beta-antraceno, un compuestofluorescente, conjugado con antisuero antineumocóccico. Poco después un grupo de científicos empleó un antisuero conjugado con fluoresceína que permitía la identificación de los complejos inmunes de forma más eficaz. Es una técnica muy utilizada en el campo de la medicina para el diagnóstico de una gran variedad de padecimientos, entre los que se encuentran influenza, toxoplasma, identificación deanticuerpos anti-DNA y rabia, entre otros [Anónimo 2, 2003]. En la década del ochenta del pasado siglo se demostró su aplicabilidad en el diagnóstico de las bacterias fitopatógenas, y hoy es una de las técnicas más utilizadas en este campo.

FUNDAMENTO, VENTAJAS, VARIANTES Y USO DE LA TÉCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA
El fundamento de la técnica radica en la capacidad que muestran algunos elementos ocompuestos fluorescentes, denominados fluorocromos, en fijarse a los anticuerpos mediante un enlace químico estable que no puede romperse durante el curso de la reacción inmunológica. Se encuentran diversos ejemplos de fluorocromos naturales, como algunas vitaminas, esteroides, porfirinas, etc. Otros compuestos que fluorescen –rodamina, auramina, fluoresceína, colorantes de acridina– se utilizanen distintas técnicas de tinción, como la tinción de microorganismos ácido-resistentes con auraminarodamina en muestras de tejido y esputo. La inmunofluorescencia conjuga la observación de la morfología con la especificidad inmunológica, evidencia tanto los gérmenes vivos como los muertos y requiere solamente de pequeñas cantidades de antígeno (Ag), lo que permite evidenciar cantidades mínimas deAg aun en un medio complejo de gérmenes no cultivables, así como investigar anticuerpos (Ac) con Ag difíciles de preparar. Además, empleando la técnica se pueden revelar Ac llamados incompletos, que no precipitan, no aglutinan y no fijan el complemento. La inmunofluorescencia permite identificar un Ag con la ayuda de un inmunosuero conocido e investigar y titular un Ac con la ayuda de un Ag...