La leche
Páginas: 3 (624 palabras)
Publicado: 30 de septiembre de 2010
EXTRACCION DE ADN DE MATERIAL VEGETAL
RUBY ANDREA CASTANO CASTRILLON
DIANA CAROLINA ORTEGA LOPERA
LILIANA ANDREA SANTA
ALEXANDRA MUNOZ
JORGE ARANGO
DOCENTE
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍAM-W 8-10; 20-22
FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
MEDELLIN
2010
OBJETIVOS
* Comprender y analizar losprocedimientos necesarios para extraer ADN de buena calidad y alta pureza.
* Obtener la mayor cantidad posible del ADN de alto peso molecular, libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores deenzimas.
* Reconocer la importancia de los procedimientos en la extracción del ADN.
PROCEDIMIENTO
Ruptura de tejidos y paredes celulares. Consiste en pulverizar el material vegetal abajas temperaturas, generalmente empleando nitrógeno líquido o hielo seco, en este caso se reemplazo por el ultracongelador a -85 grados centrigrados
Ruptura de membrana celulares para liberar elADN. Se hace macerando
Se pesan 70 mg en balanza, se pasa a tubo eppendorf y se le agrega 1mL de buffer 1(tris HCl, EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, PEG)
Centrifugar a 12 rpm por 5min a 4 gradoscentígrados y remover fase acuosa
Peller+ 500uL de buffer 2 (EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, tris HCl, NaCl, CTAB,sodium sarcocil
Incubar en baño de Maria a 60 C por 10 min
Adicionar igualvolumen de mezcla cloroformo-alcohol 24:1 por 15 min
Centrifugar 12rpm, y tranfiero fase acuosa a tubo eppendorf
Adicionar 2 volúmenes de isopropanol para precipitar ADN, centrifugar a 12 rpmpara remover el isopropanol
Lavar los pellet de ADN obtenidos con etanol frio al 70% y secar
Diluir el DNA en 300uL de TRIS EDTA
Leer absorbancias a 260 nm y 280 nm y hacer relaciónDATOS Y RESULTADOS
En el tubo eppendorf se obtuvo un precipitado de color blanco, el cual correspondía a los ácidos nucleídos del material vegetal, en este caso a las arvejas, por métodos...
RUBY ANDREA CASTANO CASTRILLON
DIANA CAROLINA ORTEGA LOPERA
LILIANA ANDREA SANTA
ALEXANDRA MUNOZ
JORGE ARANGO
DOCENTE
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍAM-W 8-10; 20-22
FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
MEDELLIN
2010
OBJETIVOS
* Comprender y analizar losprocedimientos necesarios para extraer ADN de buena calidad y alta pureza.
* Obtener la mayor cantidad posible del ADN de alto peso molecular, libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores deenzimas.
* Reconocer la importancia de los procedimientos en la extracción del ADN.
PROCEDIMIENTO
Ruptura de tejidos y paredes celulares. Consiste en pulverizar el material vegetal abajas temperaturas, generalmente empleando nitrógeno líquido o hielo seco, en este caso se reemplazo por el ultracongelador a -85 grados centrigrados
Ruptura de membrana celulares para liberar elADN. Se hace macerando
Se pesan 70 mg en balanza, se pasa a tubo eppendorf y se le agrega 1mL de buffer 1(tris HCl, EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, PEG)
Centrifugar a 12 rpm por 5min a 4 gradoscentígrados y remover fase acuosa
Peller+ 500uL de buffer 2 (EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, tris HCl, NaCl, CTAB,sodium sarcocil
Incubar en baño de Maria a 60 C por 10 min
Adicionar igualvolumen de mezcla cloroformo-alcohol 24:1 por 15 min
Centrifugar 12rpm, y tranfiero fase acuosa a tubo eppendorf
Adicionar 2 volúmenes de isopropanol para precipitar ADN, centrifugar a 12 rpmpara remover el isopropanol
Lavar los pellet de ADN obtenidos con etanol frio al 70% y secar
Diluir el DNA en 300uL de TRIS EDTA
Leer absorbancias a 260 nm y 280 nm y hacer relaciónDATOS Y RESULTADOS
En el tubo eppendorf se obtuvo un precipitado de color blanco, el cual correspondía a los ácidos nucleídos del material vegetal, en este caso a las arvejas, por métodos...
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