La leche

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EXTRACCION DE ADN DE MATERIAL VEGETAL

RUBY ANDREA CASTANO CASTRILLON
DIANA CAROLINA ORTEGA LOPERA
LILIANA ANDREA SANTA
ALEXANDRA MUNOZ

JORGE ARANGO
DOCENTE

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍAM-W 8-10; 20-22

FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
MEDELLIN
2010

OBJETIVOS

* Comprender y analizar losprocedimientos necesarios para extraer ADN de buena calidad y alta pureza.

* Obtener la mayor cantidad posible del ADN de alto peso molecular, libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores deenzimas.

* Reconocer la importancia de los procedimientos en la extracción del ADN.

PROCEDIMIENTO

Ruptura de tejidos y paredes celulares. Consiste en pulverizar el material vegetal abajas temperaturas, generalmente empleando nitrógeno líquido o hielo seco, en este caso se reemplazo por el ultracongelador a -85 grados centrigrados

Ruptura de membrana celulares para liberar elADN. Se hace macerando

Se pesan 70 mg en balanza, se pasa a tubo eppendorf y se le agrega 1mL de buffer 1(tris HCl, EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, PEG)

Centrifugar a 12 rpm por 5min a 4 gradoscentígrados y remover fase acuosa

Peller+ 500uL de buffer 2 (EDTA, sorbitol, mercaptoetanol, tris HCl, NaCl, CTAB,sodium sarcocil

Incubar en baño de Maria a 60 C por 10 min

Adicionar igualvolumen de mezcla cloroformo-alcohol 24:1 por 15 min

Centrifugar 12rpm, y tranfiero fase acuosa a tubo eppendorf

Adicionar 2 volúmenes de isopropanol para precipitar ADN, centrifugar a 12 rpmpara remover el isopropanol

Lavar los pellet de ADN obtenidos con etanol frio al 70% y secar

Diluir el DNA en 300uL de TRIS EDTA

Leer absorbancias a 260 nm y 280 nm y hacer relaciónDATOS Y RESULTADOS

En el tubo eppendorf se obtuvo un precipitado de color blanco, el cual correspondía a los ácidos nucleídos del material vegetal, en este caso a las arvejas, por métodos...
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