lic enfermería

Bol Pediatr 1991; 32: 183 - 192

Fundamentos del análisis genotípico. Sondas genéticas

ANTONIO MONTALVO CORREA"

El análisis genotípico, a diferencia
del análisis fenotípico, nos va a permitir
examinar el genotipo de un carácter de
un individuo independientemente de su
manifestación externa, o fenotípica. Por
tanto, tanto en expresión dominante
como regresiva, homo comoheterocigótica, será posible detectar dicho rasgo
o alteración.
Los primeros estudios del genoma
humano con fines diagnósticos se realizan en 1976, descubriéndose la primera
delección en un gen humano, concretamente en el de la (X,-talasemia, y en
1978 el mismo Y. W. Kan descubre el
primer polimorfismo de restricción asociado a una enfermedad, que fue la drepanocitosis.
Desde entonces, aunque lametodología ha logrado importantes mejoras, el
fundamento del análisis· genotípico
sigue basándose en los mismos principios. Independientemente del método
en concreto aplicado, el análisis genotípico se basa en:
Las propiedades de asociación entre
cadenas de DNA de hebra simple. En
concreto, la asociación entre una cadena de DNA de hebra simple del sujeto
en estudio y otra cadena de hebra simpleconocida, con un tamaño mínimo
de 20 nucleótidos, a la que llamamos
sonda. Asociación que es debida al apareamiento entre las bases complementarias de estos ácidos nucleicos. Entre la
Adenina y la Timina (o Uracilo en el
caso del RNA) y la Guanina y la Citosina, apareamiento éste más estable que
el anterior. Otros apareamientos entre

TABLA 1
ESTABILIDAD EN LOS EMPARE]AMIENTOS
ERRONEOS DENUCLEOTIDOS
EMPAREJAMIENTOS

EMPAREJAMIENTOS ERRONEOS

ESTABLES

Muy

Menos

Estabilidad

inestable inestables no conocida

---------A-T

A-C

G-C

A-G

A-A
T-C
T-T

G-T

G-G

c-c

estas bases resultan en formas de asociación mucho menos estables o completamente inestables (tabla n. ¿Porqué
se asocian estas bases? Sencillamente
porque asociadas entre sí seencuentran
en un nivel energético más estable.
Ahora bien, en la asociación resultante
entre las muchas bases de estas cadenas, de cientos o miles de nucleótidos,
alcanzar ese nivel de máxima estabilidad o de máxima asociación, no sólo
requiere una máxima complementariedad, sino que además, las condiciones
químicas (de tipos y de concentración
de iones, acidez, etc.) y físicas (temperatura, etc.)del medio han de ser 10
más adecuadas posibles para permitir el
encuentro "dándole tiempo> de las respectivas bases complementarias, y una
vez encontradas entre sí, que les permitan permanecer «tranquilamente» asociadas mediante esos puentes de hidrógeno, dos para la pareja adenina-timina y
tres para la pareja guanina-citosina.
Por el contrario, toda dificultad al
emparejamiento de estasbases, debido
a: poco tiempo de reacción, reaccionan-

• Profesor de Biología Molecular. Universidad de Can,tabria.
• Conferenr;ia pronunciada en el IV Memorial Profesor «Guillermo Arce•.

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ANTONIO MONTALVO CORREA

tes en condiciones poco adecuadas por
influencia de las propiedades químicas
del medio o demasiado movimiento
molecular debido a una temperatura
iandecuada, dificultanel establecimiento y mantenimiento de los enlaces que
hacen posible y estabilizan estas uniones. Todo esto puede producir interferencias en esta asociación y por tanto,
errores.
De esto creo que queda muy claro
que en la realización de estas técnicas,
es muy importante para "poderse fiar»
de los resultados, la precisión y rigor en
el desarrollo de las mismas. Estos estudios pueden tener unmargen de fiabilidad muy bajo cuando son realizados
por quien no conoce bien esta problemática, o laboratorios insuficientemente
preparados en material o personal para
ello.
Además de esta asociación o "hibridación», como la denominamos técnicamente, entre el DNA del sujeto y la
sonda, es también absolutamente preciso, disponer de un sistema de corte de
gran precisión y especificidad en el...