Lowry

VALORACION DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE LOWRY

1.-FUNDAMENTO TEÓRICO

El método de Lowry (1951) es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade unreactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color de la disolución resultante proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer (verapartado de fotometría).

Este método consta de dos etapas:

1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlacespeptídicos. Estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos de tirosina que van aparticipar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato.

2) La reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin-Ciocalteaupor los grupos fenólicos de los residuos de tirosina presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es elácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso.
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Reacción entre la proteína y lo reactivosBIBLIOGRAFÍA
O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr y R.J. Randall. J. Biol. Chem. 193: 265-275 (1951)
2.- MATERIAL Y REACTIVOS

Material

- Tubos de ensayo
- Pipetas
- Colorímetro y cubetas decolorímetro

Reactivos

- Reactivo A: Na2CO3 al 2%, NaOH 0,1 M
- Reactivo B1: CuSO4 ( 5H2O al 1%
- Reactivo B2: tartrato sódico-potásico al 2%
- Reactivo C: Se prepara en el momento deiniciar el ensayo, mezclando A, B1 y B2 en proporciones 50:0,5:0,5 (en volumen)
- Reactivo Folin-Ciocalteau: reactivo comercial diluido a 1/4
- Solución patrón de albúmina de suero bovino (BSA) de...