Maiz

I. EL PROBLEMA
- Observar el efecto de la concentración de sustrato y de enzima en la velocidad de
reacción enzimática.
II. BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN.
- Efecto de la concentración de enzima y desustrato en la velocidad de reacción
- Ecuación de Michaelis-Menten de la velocidad de reacción enzimática
- Significado de la velocidad máxima y de la constante de Michaelis.
III. MATERIALES YREACTIVOS.
Materiales por grupo.
- 20 tubos de ensayo
- un vaso de precipitados de 450ml
- dos vaso de precipitados de 250ml
- 5 pipetas graduadas de 5ml
- Una placa de calentamiento
- Una gradilla- Un aro con nuez
- Una pinza para tubo de ensayo
- Un frasco lavador
- Un pipeteador
Materiales y reactivos generales. (volumnes calculados para 10 grupos de laboratorio)
- Solución de almidónal 1% ( 2,0 L)
- Buffer pH 7,2 (1,0 L)
- Solución de α-amilasa
- Ácido 3,5-dinitrosalicílico ( 1 L)
- Agua destilada
- Dos baños de maría a 35ºC
- Espectrofotómetros y celdas
- Micropipetas de0 a 100 lamdas y puntas
- Toallas de papel.
Departamento de Ciencias Básicas 2/3
IV. PROCEDIMIENTO.
1. Efecto de la concentración de sustrato:
Tabla No 1:
tubo Almidón (ml) Buffer pH 7.2 (ml)Agua (ml) Enzima (μl)
B 5,0 2,0 5,1 0,0
1 0,5 2,0 9,5 100
2 1,0 2,0 9,0 100
3 2,0 2,0 8,0 100
4 3,0 2,0 7,0 100
5 4,0 2,0 6,0 100
6 5,0 2,0 5,0 100
En siete (7) tubos de ensayo adicionar lascantidades de solución de almidón, buffer pH 7,2 y agua
que se indican en la tabla No1. Colocar los tubos al baño maría a 35ºC por 5 minutos, luego
agregue la cantidad de enzima especificada en latabla, homogenice y deje incubando a la misma
temperatura por 10min.
Pasado el tiempo de incubación, agregue 3 ml de la solución del ácido 3,5-dinitrosalicílico y
coloque los tubos en un baño aebullición por 7minutos; retire y enfríelos cuidadosamente en un
chorro de agua fría o en un baño de agua con hielo.
Lea la absorbancia de cada uno de los tubos a 575nm.
2- Efecto de la concentración de...