medicion de ATP

Medición de ATP
Discusión:
La bioluminiscencia, propuesta en 1960 como una técnica para estimar la actividad microbiana en los procesos biológicos. Todos los microorganismos vivos se puedendetectar midiendo su energía celular que se encuentra en forma de adenosin trifosfato (ATP). La cantidad de ATP se mide mediante la bioluminiscencia generada en una reacción estequiométrica:


Estareacción se produce cuando una forma reducida de luciferina (fenol heterocíclico termoestable) junto con una molécula de ATP en presencia de luciferasa (enzima termoestable se libera como oxiluciferina,es decir, se produce una descarboxilación oxidativa de la luciferina y la liberación de fotones. Por cada molécula de ATP consumida se produce un fotón.
El complejo enzimático luciferina-luciferasaque es específico para la medición de ATP se detectó por primera vez de manera natural en la cola de la luciérnaga Photinus pyralis.
Cuando la reacción de la bioluminiscencia se realiza en condicionesóptimas, la señal lumínica resultado del balance entre reducción y oxidación es estable durante horas; no obstante, en condiciones de campo la emisión de luz será menor porque depende de la demandade oxígeno activo.
La luz producida en la bioluminiscencia se mide en un tubo detector mutiplicador y se expresa en unidades relativas de luz (URL) cuantificadas mediante un fotómetro o luminímetro.El ensayo de MTT se basa en la reducción metabólica del l Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5difeniltetrazol (MTT) realizada por la enzima mitocondrial succinato-deshidrogenasa en un compuestocoloreado de color azul (formazán), permitiendo determinar la funcionabilidad mitocondrial de las células tratadas. Este método ha sido muy utilizado para medir supervivencia y proliferación celular.Los resultados variaron considerablemente, lo más probable es que haya sido error al momento de llevar a cabo el procedimiento, además que participaron diferentes personas en este mismo aumentando...