metodo de lowry

METODO DE LOWRY
Es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas,siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley deLambert-Beer

Este método consta de dos etapas:

1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, seunen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan eldesdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenólicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ semantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato.

2) La reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenólicos de los residuosde tirosina, presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácidofosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenolicos da lugar a un complejo de color azul intenso.


VENTAJAS
• MUY SENSIBLE
• MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZDE LA MUESTRA
• MÁS ESPECÍFICO QUE LA MAYORÍA DE LOS OTROS MÉTODOS
• RELATIVAMENTE SIMPLE
• SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 HORAS

DESVENTAJAS
• EL COLOR VARÍA CON DIFERENTESPROTEÍNAS (MÁS QUE EL MÉTODO DE BIURET)
• EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS
• LA SACAROSA, LÍPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACÁRIDOS YHEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓN
• LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZÚCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCION.