Metodología biomasa

Metodología para el conteo de Biomasa mediante espectrofotometría

Reactivos utilizados
100 ml de agua de ósmosis
0.9 g de NaCl
0.1 ml de Twen 20

Se prepararon 100 ml deuna disolución de NaCl 9 g/L y Tween 20 al 0.1%

Preparación de una curva de calibración de B.cereus

La disolución madre se tomó el segundo día de la fermentación. Laconcentración de esta disolución madre es de 1.18x109 bacterias/ml según cámara de Neubauer.

A partir de esta disolución madre, se prepararon las diluciones mostradas en el cuadro I yse les midió la respectiva absorbancia.

Nota: En el análisis por espectrofotometría, la absorbancia no puede ser mayor de 0.5. Por arriba de este valor, el método pierdelinealidad.

Cuadro I. Datos para la curva de calibración
Número Patrón | Alícuota (ml) | Volumen aforo (ml) | Concentración final bac/mlL |
1 | 0,025 | 3,025 | 9,75E+06 |
2 |0,05 | 3,05 | 1,93E+07 |
3 | 0,07 | 3,07 | 2,69E+07 |
4 | 0,09 | 3,09 | 3,44E+07 |
5 | 0,03 | 3,03 | 1,17E+07 |
6 | 0,06 | 3,06 | 2,31E+07 |

Resultados

Análisis de lasmuestras

Las muestras fueron diluidas con la disolución de NaCl y Twen 20 mencionada anteriormente, las diluciones y los resultados se muestran en el cuadro II.

Cuadro II.Datos y resultados de las muestras analizadas por espectrofotometría

Nombre | Alícuota ml | Volumen final ml | Absorbancia | Resultado (bac/ml) |
1 | 0,5 | 3,5 | 0,1521 |8,27E+07 |
2 | 0,5 | 3,5 | 0,2971 | 1,61E+08 |
3 | 0,5 | 3,5 | 0,4794 | 2,60E+08 |
4 | 0,05 | 3,05 | 0,257 | 1,22E+09 |
5 | 0,05 | 3,05 | 0,2875 | 1,36E+09 |
6 | 0,05 | 3,05| 0,2757 | 1,30E+09 |
7 | 0,05 | 3,05 | 0,3028 | 1,43E+09 |
8 | 0,05 | 3,05 | 0,253 | 1,20E+09 |
9 | 0,05 | 3,05 | 0,2394 | 1,13E+09 |
10 | 0,05 | 3,05 | 0,2277 | 1,08E+09 |