Microbiologia Muestra De Agua 1

Microorganismos presentes en agua
Las aguas de los pozos contienen suficientes nutrientes para soportar el crecimiento de varios microorganismos. .Además, cuando se encuentran en el agua no forman una solución perfecta, sino una suspensión con un grado de variabilidad que le es inherente.
Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se producen en cadadivisión continúan su vida independientemente formándose una suspensión de células libres.
Muestra
Obtención de la muestra
La muestra de agua será obtenida de un pozo. Debe ser representativa, por lo cual deberá tomarse cuidadosamente, procurando no remover ni agitar el fondo.
Puede ser tomada directamente a nuestro frasco esterilizado, o introduciendo un recipiente más grande, lo máslimpio posible, mediante el cual se captara una mayor cantidad de agua, y después tomarla con nuestro frasco.
Todo debe realizarse cuidadosamente, procurando que la muestra sea lo más representativa posible. La muestra debe conservarse fresca, y no debe pasar más de un día para ocuparla.
Preparación de la muestra para su cultivo
Diluciones
En caso que en la muestra se observe a simple vistauna alta carga de microorganismos, se puede proceder a la dilución.
La cual podemos realizarla en agua destilada estéril, o en una solución del medio de cultivo que se utilizará debidamente esterilizada y sin agar.
Se miden 10 ml si la muestra liquida, en forma aséptica, realizando la operación cerca de un mechero encendido (regla) y se transfieren a un Erlenmeyer conteniendo 90 ml de agua depeptona. Se obtiene una dilución 1:10.
Aislamiento de un cultivo
Medio de Cultivo
Se utilizará un medio de cultivo sólido, ya que se multiplican localmente en el punto de la inoculación y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es típica de cada especie determinada.
Se determinaran las bacterias presentes, por lo cual se usara un:
Agar nutritivo
Medio de cultivo utilizado parapropósitos generales, para el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.
Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante.
Sucomposición está a base de 3 g de extracto de Carne de buey, 5 g de peptona tríplica de gelatina, 15 g de agar, 8 g de cloruro sódico y agua destilada hasta 1000 ml.
Instrucciones
31 g de polvo por litro de agua destilada es el valor de referencia.
1. Se pesa la cantidad necesaria para preparar 100 mL de Agar nutritivo en polvo.
2. Se colocan 100 mL de agua destilada en un matraz Erlenmeyer de250 mL con tapón y se vierte la cantidad pesada de cada medio.
3. Se etiqueta el matraz con el nombre del medio que contiene.
4. Para asegurar la completa disolución del agar, el medio se calienta hasta ebullición al mismo tiempo que se somete a agitación, previamente a su esterilización en el autoclave.
Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de aluminio para llevar aesterilizar en el autoclave (121º C, 15-20 min).
5. Preservando la esterilidad de las cajas de Petri, se etiquetan de acuerdo con el medio que van a contener.
6. Una vez estéril, el medio se dejan enfriar, hasta que la temperatura se soporte con el dorso de la mano, posteriormente se vierte en las cajas de Petri, en zona de esterilidad (cerca del mechero) colocando una cantidad de medio tal queapenas cubra la mitad del volumen de la caja (NO SE DEBEN LLENAR LAS CAJAS CON MEDIO), distribuir aproximadamente 12 ml.
7. Las cajas se dejan enfriar para que el medio solidifique
Siembra en placa
8. Se mide 1 ml con pipeta estéril de la dilución a sembrar, se vierte la misma en una placa de Petri, levantando lo menos posible la tapa.
9. Tapar rápidamente e imprimir a la placa movimientos...