Microscopia tinciones bacterianas

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5. MICROSCOPÍA. TINCIONES BACTERIANAS 5.1. INTRODUCCIÓN La microbiología se ha podido desarrollar a partir de la aparición y progreso del microscopio, gracias al cual se pueden visualizar las bacterias. El ojo humano no es capaz de discriminar más allá de 0,1 mm. El microscopio óptico tiene como límite de poder de resolución unos 0,20 microns.Están a su alcance estructuras celulares como cromosomas, nucleolos, cloroplastos, mitocondrias. El microscopio electrónico, que tiene un poder de resolución del orden de 4 Angstrom (C), es capaz de visualizar la estructura de las membranas, ribosomas, etc. 5.2. EL MICROSCOPIO ÓPTICO En microscopía nos podemos encontrar un microscopio simple, que no es más que una lente biconvexa o un microscopiocompuesto, que emplea dos sistemas de lentes separadas, consiguiendo con ello mayores aumentos. Todo microscopio compuesto constará de: Un sistema óptico que aumenta la imagen. Un sistema de visualización que amplifica adecuadamente dicha imagen. 5.2.1. Contraste. Absorción diferencial de la luz entre la muestra y el medio. El grado de contraste se puede mejorar, aumentándolo mediante técnicas detinción. 5.2.2. Amplificación. La amplificación de la imagen en un microscopio se obtiene mediante dos sistemas de lentes: Un primer sistema de lentes situado más cerca de la muestra, el objetivo que aumenta la imagen real. El segundo sistema de lentes, que se sitúa más alejado de la muestra y más próximo al ojo humano, es la lente ocular, que se encargará de ampliar esa imagen real originando unaimagen virtual que es la que percibe el ojo humano. Los microscopios en la mayoría de laboratorios de microbiología presentan los objetivos siguientes: objetivos secos, de x4, x10, x40 objetivos de inmersión, x100 aumentos. La amplificación total de un microscopio óptico se obtiene multiplicando la ampliación del objetivo, por la ampliación del ocular.

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485.2.3 Poder de resolución. El poder de resolución de una lente es la capacidad que ésta presenta para poder observar dos puntos adyacentes como distintos y separados.El poder de resolución en un microscopio está en función de la longitud de onda () de la luz empleada y de las características del sistema de lentes, llamado apertura numérica.

Fig. 5.1 El límite o poder de resolución de unmicroscopio (d) es la distancia mínima entre dos puntos que permite distinguirlos uno de otro. Se expresa como: d = 0,5 / N sen   = longitud de onda de la luz empleada Nsen  = apertura numérica (medida del tamaño del cono de luz refractada por la preparación que admite el objetivo) N, es el índice de refracción del medio (aire/aceite de inmersión) que hay entre la muestra y la lente del objetivo, es la mitad del ángulo que forma el cono de la lente del objetivo.

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Cuanto más pequeño sea el poder de resolución de un microscopio, más capacidad de amplificación tendrá. Esto se consigue aumentando la apertura numérica (para microscopio óptico, 1,25 es un valor normal de apertura numérica, 1,4 es un valor máximo). La apertura numéricadepende del índice de refracción del medio que hay entre la muestra y el objetivo. Como que el índice de refracción del aire es menor que el del vidrio, los rayos luminosos se refractan cuando pasan del portaobjetos al aire. La mayoría de los rayos luminosos que han atravesado la muestra se desvían en un ángulo tan grande que se pierden. El aceite de inmersión (N = 1,56) tiene, aproximadamente, el mismoíndice de refracción que el vidrio. Si ponemos una gota de aceite entre la preparación y el objetivo, la mayoría de los rayos luminosos procedentes de la muestra pasan directamente al objetivo, aumentando la resolución del microscopio y observándose una imagen más clara. (Naire = 1) No se ha de utilizar nunca aceite de inmersión con objetivos secos. La distancia a la muestra es mayor y los...