Tinciones bacterianas

Tinciones Bacterianas:

La tinción o coloración es una técnica que nos ayuda en microbiología para mejorar el contraste de la imagen vista en el  microscopio.

* Preparación de la muestra:

Para teñir microorganismos se debe depositar una pequeña cantidad de la muestra a examinar sobre un portaobjeto limpio (1 – 2 gotas de cultivo líquido). Si la muestra proviene de un medio sólido,esta se emulsiona con unas gotas de suero fisiológico estéril. La muestra se extiende con el asa, hasta que quede una fina película sobre el portaobjeto. Esta película se denomina frotis.
Para teñir el frotis, éste debe estar seco. Esto se logra mediante un procedimiento llamado fijación, que puede realizarse usando sustancias químicas o calor. Lo más usado es la fijación por calor que consisteen pasar el portaobjeto, con el frotis, varias veces sobre la llama del mechero. Este procedimiento deshidrata y mata las células presentes en el frotis y hace que se adhieran al porta objeto.
* Tipos de tinciones:
Se pueden diferenciar tres tipos de tinciones:
* Tinción simple hace uso de un solo colorante. Permite ver forma y tamaño.
* Tinción azul de metilo.
* Tincióndiferencial permite separar (diferenciar) las bacterias en grupos de acuerdo a su reacción diferencial frente a dos colorantes.
* Tinción de Gram.
* Tinción de Ziehl-Neelsen.
* Tinción especial útil para observar estructuras celulares (ej. cápsula, esporas y flagelos) o microorganismos difíciles de teñir (ej. Micoplasma y Rickettsias).
* Tinción negativa.

Tinción de azulde metileno: el azul de metileno es un buen colorante simple que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.

Tinción con azul de metileno de S. cerevisiae FYBL1-8BTinción negativa: La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como latinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

Células levaduriformes capsuladas (Cryptococcus)Tinción diferencial de Gram: es la tinción de uso corriente en microbiología y permite dividir las bacterias en dos grupos, grampositivas y gramnegativas.

Técnica:
1. Realizar frotis y fijación de la muestra.
2. Teñir con cristal violeta por 1 minuto.
3. Lavar con agua y aplicar lugol (El lugol es un mordiente que tiene por función aumentar la afinidad del colorante, en este caso cristalvioleta, por las estructuras celulares a las cuales éste se une) por 1 minuto.
4. Lavar con agua y decolorar con alcohol por 30 segundos.
5. Lavar con agua y teñir con fucsina básica.
6. Lavar con agua y dejar secar al aire.
7. Observar al microscopio con objetivo de inmersión.


Bacillus subtilis (Gram positive) Aumento 1000xEscherichia coli (Gram negativas) 

Fundamento de la tinción de Gram:
Probablemente la diferencia entre bacterias grampositivas y gramnegativas se debe a la naturaleza física de sus paredes celulares. Parece ser que, en grampositivas, durante la etapa de decoloración, el alcohol contrae los poros de la gruesa capa de peptidoglucano (constituye la estructura básica de la pared celular de...