Novedoso esquema de inmunización para la obtención de anticuerpos anti-lps de haemophilus influenzae tipo b

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REV CUBANA MED TROP 2001;53(1):66-8

COMUNICACIÓN BREVE
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL "PEDRO KOURÍ"

Novedoso esquema de inmunización para la obtención de anticuerpos anti-LPS de Haemophilus influenzae tipo b
Lic. Rosabel Falcón Márquez,1 Lic. Gilda Toraño Peraza,2 Lic. Berta Victoria Martínez3 y Lic. Isis Tamargo Martínez4

RESUMEN Se ensayó un novedoso esquema de inmunizacióndirigido a la elevación de anticuerpos para Haemophilus influenzae tipo b, en el que se combinaron como inmunógenos un antígeno celular inactivado con formaldehído 0,5 %, y un antígeno lipopolisacarídico parcialmente purificado mediante un método de precipitación selectiva con solventes orgánicos. Se obtuvieron anticuerpos de elevada especificidad y actividad biológica con títulos de hasta 1:256 porcontrainmunoelectroforesis, que fueron purificados mediante precipitación selectiva con sulfato de amonio y cromatografía de intercambio iónico con la utilización de una columna de DEAE-Sepharose. La metodología propuesta en este trabajo permite la producción de anticuerpos purificados, útiles en la optimización de técnicas de diagnóstico serológicas y de serotipaje de cepas de H. influenzae b.DeCs: HAEMOPHILUS INFLUENZAE TIPO B; ESQUEMA DE INMUNIZACIÓN; CONTRAINMUNOELECTROFORESIS/ /métodos; LIPOPOLISACÁRIDOS.

Haemophilus influenzae tipo b (Hib) es el agente causal de 99 % de las infecciones invasivas causadas por su especie. 1 Dentro de estas, las meningitis constituyen el mayor problema de salud al ocasionar altas tasas de morbilidad y mortalidad en niños menores de 5 años. 2 Diversoscomponentes celulares, así como sustancias extracelulares, desempeñan un papel importante en la patogenia de Hib. Dentro de estos, el lipopolisacárido (LPS), componente de la membrana externa de las bacterias gramnegativas, es un potente factor de virulencia, cuyo efecto ciliostático favorece la colonización y diseminación de este microorganismo en el tracto respiratorio.

El LPS constituye unantígeno timoindependiente pobremente inmunogénico, que contiene en su estructura varios determinantes antigénicos capaces de estimular la producción de anticuerpos bactericidas.3,4 Con el objetivo de contribuir a la optimización de sistemas útiles en el inmunodiagnóstico de Hib, el laboratorio de Infecciones Respiratorias Agudas Bactericidas (IRAB) del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"(IPK) se propuso obtener inmunoglobulinas purificadas a partir de anticuerpos específicos contra el LPS de Hib, mediante un esquema de inmunización totalmente novedoso.

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Máster en Microbiología. Licenciada en Bioquímica. Investigadora Agregada. Máster en Bacteriología-Micología. Licenciada en Microbiología. Investigadora Agregada. Licenciada en Bioquímica. Aspirante a Investigadora.Licenciada en Microbiología. Investigadora Auxiliar.

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Se utilizaron como inmunógenos un antígeno celular (Agc) y un antígeno lipopolisacarídico (Ag-LPS), producidos a partir de la cepa Hib ATCC 10211. Para la preparación del Agc, la cepa fue cultivada en placas de agar chocolate por 24 h a 37 °C en atmósfera de CO2 5 %, la biomasa obtenida fue resuspendida en solución salina estéril einactivada con formaldehído 0,5 %, y la concentración celular se ajustó a 1,5 × 10 9 células/mL. Para la preparación del Ag-LPS la cepa fue cultivada en caldo cerebro-corazón suplementado con 0,2 µg/mL de hemina, NAD y 0,04 g/µL de glucosa. El Ag-LPS fue parcialmente purificado por medio del método fenol-H2O descrito por Westphal y Jann5 y el rendimiento estimado fue de 1,56 mg/mL de polisacárido, conla utilización del método fenol-sulfúrico.6 La concentración de proteínas determinada por el método de Lowry fue de 0,12 mg/mL 7 y el contenido de ácidos nucleicos, calculado según Maniati, fue de 87,9 µg/mL.8 Para la obtención de anticuerpos específicos anti-LPS, se ensayó un esquema de inmunización en conejos albinos de 2,5 kg de peso y 3 meses de edad que constó de 2 etapas. Durante la...