Obtencion Lipasa

Grasas y Aceites Vol. 50. Fase. 3 (1999), 177-180

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INVESTIGACIÓN
Estudio comparativo de la obtención de extractos crudos y semipurificados de lipasa de salvado de arroz
Por A. Bella Cruz y D- Barrera-Arellano Laboratorio de Óleos e Gorduras; DTA/FEA/UNICAMP Caixa Postal 6091, 13.083-970 Campinas SP, Brasil. E-mail: barrera@obelix.unicamp.br

RESUMEN Estudio comparativo de laobtención de extractos crudos y semi-purifícados de lipasa de salvado de arroz. Los extractos crudos de lipasas de salvado de arroz desengrasado fueron obtenidos con tres diferentes soluciones de extracción: 1 - CaCb 0.01 M; 2 - Sacarosa 0.6M, KC110mM, MgCb 1 mM, Ditiotreitol 2mM; 3 - Sacarosa 0.4M, Ditiotreitol 2mM. Las variedades estudiadas pH (6.0, 7.0, 8.0) y tiempo de extracción (1h, 2h, 3h). Latemperatura de extracción fue de 4 °C. Los extractos obtenidos presentaron diferentes actividades de lipasa siendo el extracto crudo obtenido con CaCl2 0.01 M el que mostró la mayor actividad específica (12. Imü/mg). La purificación parcial de este extracto crudo con acetona y sulfato amónico resultó en fracciones con actividad específica de 50.7mU/mg y 63.5mU/mg respectivamente. PALABRAS-CLAVE: Enzima- Extracción - Lipasa - Purificación - Salvado de arroz.

SUMMARY Comparative study of the obtention of crude and semi-purified lipase extracts from rice bran. Crude lipase extracts from defatted rice bran were obtained using three different extraction solutions: 1 - CaCb 0.01 M; 2 - Sacarose 0.6M, KCI lOmM, MgCb ImM, Ditiotreitol 2mM and 3 - Sacarose 0.4M, Ditiotreitol 2mM. Factors (variables)studied were pH (6.0, 7.0, 8.0) and extraction time (1h, 2h, 3h). Extraction temperature was 4 °C. The extracts obtained presented different lipase activities, and the crude extract obtained with CaCb 0.01 M was the one with the highest specific activity (12.1mU/mg). Partial purification of this crude extract with acetone and ammonium sulfate resulted in fractions with specific activities of50.7mU/mg and 63.5mU/mg, respectively KEY-WORDS: Enzyme - Extraction - Lipase - Purification Rice bran.

1.

INTRODUCCIÓN

Las lipasas (triacilglicerol acil-hidrolasa, EC 3.1.1.3) son enzimas que catalizan la hidrólisis de triacilgliceroles liberando ácidos grasos y glicerol (lUPAC-lUB, 1979).

Sin embargo en presencia de solventes orgánicos o en sistemas anhidros, las lipasas pueden presentarun comportamiento totalmente diferente, catalizando reacciones de esterificación y transesterificación (Berry y Paterson, 1990). Dependiendo de su origen, las lipasas pueden tener un peso molecular variable entre 20 000 y 200.000 Da, con actividad en amplios rangos de pH (4.0 a 9.0) y temperatura (ambiente hasta 70 °C) (Borgstron y Brockman, 1984). Con relación a su regioselectividad ensubstratos acilglicerólicos, pueden ser clasificadas en lipasas: 1,3 regioespecíf¡cas, ácido graso específicas y no regio-específicas (Macrae y Hammond, 1987; Castro y Anderson, 1995). Las lipasas han sido encontradas en muchos tejidos y fluidos de animales (mamíferos) y vegetales, o bien pueden ser producidas por procesos fermentativos utilizando diversas especies de microorganismos (hongos y bacterias).Actualmente, desde el punto de vista económico e industrial, los microorganismos han sido los preferidos como fuentes de lipasas (Mukherjee, 1994; Castro y Anderson, 1995). Trabajos recientes demuestran que es posible obtener extractos parcialmente purificados de lipasas de plantas por técnicas relativamente simples a partir de materias primas de bajo costo (Mukherjee, 1994; Jachmanián et al.,1995). En el caso del grano de arroz, que posee un potente sistema de lipasas, la mayor parte de esta actividad esta localizada en las capas externas del grano, o sea en el salvado. Este hecho convierte al salvado en una excelente materia prima para la obtención de lipasas, visto que se trata de un subproducto de bajo valor económico y de gran disponibilidad. Las lipasas del salvado de arroz han...