Pigmentos fotosinteticos

Colegio Centro Unión


Práctica No. 4 “Pigmentos fotosintéticos”






Fecha de realización: 30/Octubre/2013
Fecha de entrega: 4/Noviembre/2013



Calificación: _____




Objetivo
Separar los distintos pigmentos vegetales por medio de la cromatografía en el papel.
Marco teórico: La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han deseparar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida. La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de loscomponentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligende tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con más fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes dela muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. Hay 3 métodos principales de cromatografía: frontal, de desplazamiento y de elución. Sólo consideraremos este último, que es el más habitual, al menos en Bioquímica y Biología Molecular.
Cromatografía en papel: Es la más sencilla de las técnicas, pero sólo nos dará resultados cualitativos. Estácasi en desuso. El método se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar una pequeña cantidad de muestra en el extremo de una tira de papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga el disolvente, de manera que éste fluya por la tira por capilaridad. Cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se retira el papel y seca. Siel disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografía eficaz: la elección del disolvente y la del papel de


Material y sustancias:

Equipo:
Caja de Petri o vaso de precipitadoMortero
Tijeras
Embudo
Tubo capilar


Reactivos y Materiales Biológicos:
Espinacas o acelgas
Acetona
Éter de petróleo
Benceno
Papel filtro Wathman
Procedimiento
1. Coloca en un portero trozos de hojas de espinacas lavadas, junto con 10 o 15 ml de acetona.
2. Tritura con el pistilo del mortero hasta que se forme una pasta y el líquido adquiera una coloración verde intenso.
3.Filtra con una gasa el macerado en un tubo de ensayo.
4. Corta una tira de papel filtro de unos 2 cm de anchura y 10 cm de altura.
5. Marca en la tira de papel una línea a 1.5 cm de ambos bordes.
6. Pon con el capilar en el papel filtro dos gotas de solución de pigmentos, justo en la parte media de la línea marcada con el lápiz. Repite dos veces esta operación, dando tiempo para que la muestra sequey de más concentración de pigmentos.
7. Coloca en el vaso de precipitado una mezcla de eluyente que se prepara con la mezcla de 8.5 ml de éter de petróleo, 1 ml de acetona y .5 ml de benceno.
8. Coloca la tira de papel filtro sobre el líquido del tubo, de manera que éste no llegue a tocar la línea del lápiz ni la gota que se hizo con el capilar.
9. Espera a que el eluyente se vaya subiendo...