Politicas de avianca

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INFORME DE PASANTÍA
LICENCIATURA EN CIENCIAS BIOLÓGICAS ORIENTACIÓN BIOLOGÍA CELULAR “Algunos análisis característicos y Determinación de la Prevalencia de la Mutación de Leiden (FVQ 506) en el Factor V de la Coagulación en la Población Uruguaya” Marie-Noël Bruné Tutora: Prof. Dra. Cristina Arruti

AGRADECIMIENTOS
Este trabajo tuvo lugar en el Laboratorio Genia (Canelones 2291) bajo lasupervisión del Dr. Carlos Azambuja y en el Departamento de Bioquímica de la Facultad de Ciencias bajo la supervisión del Dr. Carlos Sanguinetti. El trabajo estuvo coordinado por la Prof. Dra. Cristina Arruti del Departamento de Biología Celular de Facultad de Ciencias. A todos ellos muchas gracias por el constante apoyo, paciencia y enseñanza. Se agradece la colaboración del Dr. Juan Carlos Cazeres ydel Téc. Lab. Humberto Lima del CASMU, junto a quienes fueron publicados los resultados, así como de la Prof. Adj. Dra. Daniela Lens del Departamento Básico de Medicina del Hospital de Clínicas por sus aportes.

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ÍNDICE
SECCIÓN I: Desarrollo de un sistema específico de rutina Objetivo Introducción Hemostasia y Mutación de Leiden Riesgo de trombosis Tratamiento Examen y su importancia enUruguay Materiales y Métodos Muestras de sangre Extracción de ADN Cuantificación Amplificación por PCR Electroforesis Enzimas de restricción Resultados Discusión SECCIÓN II: ESTUDIO DE UN CASO ESPECÍFICO Determinación del status de la mutación de Leiden en tres generaciones de una familia Importancia del conocimiento de la resistencia a la proteína C activada para el paciente y su familia Riesgo parala familia Publicación de los resultados BIBLIOGRAFÍA Pág. 23 Pág. 19 Pág. 21 Pág. 13 Pág. 6 Pág. 6

Pág. 25

Pág. 25 Pág. 26 Pág. 27

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APÉNDICE I: PROTOCOLOS DE TRABAJO PARA DETERMINACIÓN DE LA MUTACIÓN DE LEIDEN (FVQ 506) Protocolos de extracción de ADN Pág. 29

Protocolo de extracción de ADN de PROMEGA “Wizard DNA Purification System” a partir de sangre (300 l) Protocolo deExtracción de ADN según Kawasaki a partir de pellet nuclear. Protocolo de Extracción de ADN de InstaGene a partir de sangre Protocolos de preparación de soluciones de amplificación y digestión para factor V de Leiden Solución de amplificación de Leiden Solución de digestión 5 X Protocolos de preparación de geles para electroforesis Preparación de gel de agarosa Gel de poliacrilamida SDS PAGE Protocolode tinción de geles de electroforesis Protocolo de tinción de plata según Carlos Sanguinetti APÉNDICE II: REGLAS BÁSICAS DE TRABAJO EN LABORATORIO Y TÉCNICAS GENERALES DE UN LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Generalidades Bioseguridad Previniendo accidentes de trabajo Generalidades Causas que aumentan la probabilidad de accidentes Para descartar el material contaminado Para descontaminar solucionesde bromuro de etidio Antes de irse Ante un accidente de laboratorio Si se trata de un accidente con instrumento punzante Si se trata de un accidente biológico Muestras – Medidas de seguridad Pág. 39 Pág. 38 Pág. 34 Pág. 34 Pág. 35 Pág. 33 Pág. 32 Pág. 31

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GENIA Descripción de la actividad del laboratorio Riesgos Organización del laboratorio en áreas de trabajo Técnicas generales

Pág.39

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OBJETIVOS GENERALES
Este trabajo estará dividido en dos secciones y dos apéndices que comprenden los objetivos de la pasantía: I) Sección I Por una parte, la familiarización con un número de técnicas y metodologías de genética molecular. Estas técnicas son utilizadas rutinariamente en un laboratorio de biotecnología orientado a la prestación de servicios. Nos concentraremos en elestudio diagnóstico de una mutación en particular: la mutación de Leiden (FVQ 506). Para ello desarrollaremos un sistema de diagnóstico específico de rutina, para esta mutación (puntual). Para ello requerí entrenamiento en: Almacenamiento de muestras de sangre Extracción de ADN y comparación de distintos métodos de extracción Cuantificación de ADN Amplificación por PCR Electroforesis Digestión con...
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