Práctica de extracción de la cromatina

P-5 EXTRACCIÓN DE CROMATINA
P5. EXTRACCIÓN DE CROMATINA
La cromatina es el de ADN, histonas y proteínas no histónicas que se encuentra en el núcleo de las células eucariotas y que constituye elcromosoma eucariótico. Las unidades básicas de la cromatina son los nucleosomas. Éstos se encuentran formados por aproximadamente 146 pares de bases de longitud (el número depende del organismo),asociados a un complejo específico de 8 histonas nucleosómicas (octámero de histonas). Cada partícula tiene una forma de disco, con un diámetro de 11 nm y contiene dos copias de cada una de las 4 histonasH3, H4, H2A y H2B. Este octámero forma un núcleo proteico alrededor del que se enrolla la hélice de ADN (da aproximadamente 1,8 vueltas). Entre cada una de las asociaciones de ARN e histonas existe unADN libre llamado ADN "espaciador", de longitud variable entre 0 y 80 pares de nucleótidos que garantiza flexibilidad a la fibra de cromatina. Este tipo de organización, permite un primer paso decompactación del material genético, y da lugar a una estructura parecida a un "collar de cuentas".

MATERIALS Bovine or porcine brain 0.25 M sucrose containing 0.0033 M calcium acetate 2.0 M sucrose with0.0033 M calcium acetate 0.075 M NaCl with 0.024 M EDTA, pH 8.0 Tris-HCl buffer, pH 8.0 with the following molarities, 0.05 M, 0.002 M, 0.0004 M TCA (Trichloroacetic acid) Tissue homogenizerCheesecloth Refrigerated preparative centrifuge (NO LA TENEMOS) UV spectrophotometer (MÁS ADELANTEl) PROCEDURE 1. Homogenize approximately 30 gms of bovine or porcine cerebellar tissue in a teflonglasshomogenizer in 9 volumes of cold 0.25 M sucrose containing 0.0033 M calcium acetate.
ENSAYOS BIOTECNOLÓGICOS Página 1

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2. Filter the resulting brei through several layers ofcheesecloth and obtain crude nuclear pellets by centrifuging at 3500 xg for 20 minutes. 2. Resuspend the nuclear pellet in 80 mL of cold 0.25 sucrose containing 0.0033 M calcium acetate. 3. Obtain...