practica de bioquimica

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

Objetivo:
Observar las propiedades químicas que se utilizan para la identificación de diferentes tipos de carbohidratos. Identificación de carbohidratos.
Fundamento:
Los carbohidratos, glúcidos o azúcares constituyen una de las más importantes clases de moléculas constituyentes de los organismos.
Los carbohidratos son derivados aldehídicos o cetónicos dealcoholes polioxidrilados y por lo tanto tienen las propiedades características de esos grupos, como son la formación de oxina e hidrazonas.
Existen diferentes tipos de reacciones químicas que sirven para determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos (monosacáridos, disacáridos y polisacáridos) como son las siguientes:

1. Prueba de Lugol: Se basa en la formación de un complejo entreel ion I3- y la molécula de amilosa de almidón, la cual tiene una conformación helicoidal. Al introducirse el ion I3- dentro de la hélice se forma una solución color azul o negra dependiendo de la concentración. La amilopectina produce un color púrpura rojizo, y el glucógeno un color pardo rojizo.

2. Prueba del ácido Múcico: Esta prueba consiste en diferenciar la galactosa de las demásaldohexosas por formación de un ácido sacárico que es el ácido múcico. El ácido sacárico cristalino es insoluble en HNO3 diluído. El HNO3 concentrado oxida los dos carbones terminales de las aldohexosas formando los correspondientes ácidos sacáricos. En general, los ácidos sacáricos son solubles en HNO3 diluido, pero el ácido múcico es insoluble en ácido diluido.


3. Prueba de Benedict: En química, lareacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH anomérico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja. Los disacáridos como la sacarosa (enlace α (1 → 2)O) y la trehalosa (enlace α(1→1)O), no danpositivo puesto que sus OH anoméricos están siendo utilizados en el enlace glucosídico.

4. Prueba de Molish: Se basa en la acción deshidratante e hidrolizante del ácido sulfúrico concentrado sobre los carbohidratos. En esta prueba el ácido fuerte cataliza la hidrólisis de cualquier enlace glucosídico presente en la muestra, y la deshidratación del mismo a furfural (pentosas) e hidroximetilfurfural (hexosas) de los monosacáridos resultantes. Estos furfurales se condensan con naftol y dan un producto colorado. Esta prueba para la identificación de azúcares en general.

5. Prueba de Barford: Permite distinguir monosacáridos de disacáridos. Aquí el Cu2+ del reactivo (acetato cúprico en ácido acético diluido), es reducido de Cu2+ a (Cu+) en solución de ácido débil, en un tiempo de 5 a 7minutos con los monosacáridos. Los disacáridos reducen el ion Cu2+ en un tiempo de 7 a 12 minutos. El Cu2O es un precipitado de color rojo. Es necesario realizar esta prueba en condiciones de pH y de calentamiento, fijas y estrictas.

6. Prueba de Bial: Es una reacción coloreada específica para pentosas y ciertos ácidos urónicos que se descomponen al calentarse con ácidos formando pentosas bajocondiciones cuidadosamente controladas de temperatura, tiempo y concentración de HCl, las pentosas son rápidamente convertidas a furfural, mientras que el hidroximetil furfural se forma a partir de hexosas presentes. En presencia del ion férrico y orcional (5 metil resorcinol), el furfural se condensa rápidamente para producir un complejo colorado verde.



7. Prueba de Selliwanoff: Es unareacción coloreada que es específica para cetosas. En solución de HCl concentrado, las cetosas sufren una deshidratación para producir derivados del furfural con más rapidez que como lo hacen las aldosas. Posteriormente, los derivados del furfural forman complejos con el resorcinol para producir color. Consecuentemente los grados relativos del color desarrollado en una solución que contiene azúcar,...