practicas

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CELAYA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA


Manual de
Prácticas de laboratorio
de
Bioquímica
(COMPETENCIAS)










PRÁCTICA 1
OBTENCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

OBJETIVO
Demostrar la presencia de ácidos nucleicos en la levadura.

INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son polímeros de elevado peso molecular formados por nucleótidos. Losnucleótidos son esteres que se forman por acción del ácido fosfórico sobre un nucleósido, que a su vez, está constituido por la unión de una pentosa con una base aminada.
Se consideran dos clases de ácidos nucléicos: los ADN y los ARN, los cuales tienen a su cargo la transmisión de la información genética y la síntesis de proteínas, respectivamente.
Una de las diferencias entre los nucleótidos queforman uno y otro tipo de ácidos, radica en la pentosa que sirve de soporte a las bases y al ácido fosfórico. Los ADN tienen como azúcar a la D-2-desoxirribosa y los ARN a la D-ribosa.
Los ARN pueden ser hidrolizados por los álcalis y esta labilidad es útil para su detección en los procesos analíticos. La identificación de la presencia de una pentosa, confirma el diagnóstico.
En esta práctica seefectuarán ambas experiencias.

MATERIALES

REACTIVOS
1 Agitador
1 Embudo
1 Embudo Buchner
2 Matraces Erlenmeyer de 125 ml
1 Matraz Kitazato
1 placa de calentamiento
1 Pipeta de 5 ml
1 Pipeta de 10 ml
4 Tubos Falcon
2 Vasos de precipitado de 250 ml
1 Tubo de ensaye
Algodón
HCl conc. 4-5 ml
Cloruro férrico al 10% 5 ml
Etanol 10 ml
NaOH al 30% 7 ml
Papel filtro
Reactivo de BialTierra de diatomeas
Barra de levadura (alumno)
Gasa




METODOLOGÍA
1. EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
Pese 5g de levadura seca. Colóquela en un vaso de precipitado, agregue 7 ml de NaOH al 30% y agite con una varilla hasta obtener una mezcla homogénea.
Agregue 5 ml de agua y homogenice la mezcla.
Añada 5 ml de solución de cloruro férrico y mezcle.
Filtre la mezcla empleando gasa comomedio de filtración y reciba el líquido en un vaso de precipitado. Lave el residuo que queda retenido en la gasa con 15 ml de agua. El residuo se desecha.
El líquido se seca por succión en un embudo Buchner previamente acondicionado con ayudante de filtración. Inmediatamente lave el residuo con 5 ml de agua.

NOTA: El ayudante de filtración es un material polvoriento que se esparce sobre elpapel filtro que se aplica al embudo Buchner.

Añada al filtrado 10 ml de etanol y después agregue HCl concentrado gota a gota. Cada vez que agregue una gota de HCl, mezcle perfectamente con el agitador, tome una gota y colóquelo sobre un pedazo de papel indicador. Suspenda la adición de HCl cuando el pH sea ácido. La acidificación del líquido filtrado hace que se precipite el ácido nuicléico.
Pesecuatro tubos de ensaye, limpios y secos. Anote el peso.
Para concentrar el precipitado formado, distribuya el contenido del matraz en los 4 tubos Falcon y centrifugue por 5 minutos.
Decante perfectamente el líquido sobrenadante y pese los tubos.
Obtenga el rendimiento por diferencia de pesadas y repórtelo.


2. REACCIÓN DE BIAL (IDENTIFICACIÓN DE PENTOSAS)
Ponga 15 gotas del reactivo deBial a uno de los tubos y agregue 4 o 5 ml de HCl concentrado, mezcle por agitación pendular.
Tape el tubo de ensaye con un algodón e introdúzcalo en agua hirviendo por 3 minutos. Una coloración verde azulada o verde olivo indica que la reacción es positiva. Reporte el resultado.


CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las partes que constituyen un nucleótido simple?
2. ¿Qué diferencia hay entrenucleósido y nucleótido? Ejemplifique.
3. Mencione las funciones más importantes del DNA y RNA.
4. Todo tipo de organismo contiene ambos tipos de ácidos nucléicos. Explique su respuesta.


PRÁCTICA 2
PROTEÍNAS

OBJETIVO
Identificar mediante la realización de reacciones químicas, algunos componentes de la manera viva.

INTRODUCCIÓN
La constitución química de los seres vivos es muy...