Precipitacion De Proteinas

UNIVERSIDAD DE SONORA
Departamento de Ciencias Químico-Biológicas

Laboratorio de Bioquímica 1

“Precipitación de Proteínas”

Diana Bosbach Estrada
Fernanda Moreno
Nicolle Montaño

Lunes, 09 de mayo del 2011.
OBJETIVO
En esta sesión de practicarán las diferentes formas de precipitar a las proteínas
* Precipitación por salación o salting out.
* Precipitación por solventesorgánicos.
* Precipitados por formación de sales.
* Reacción de Biuret
INTRODUCCIÓN
Precipitación de proteína:
La precipitación de las proteínas es uno de los procedimientos más empleados en los procesos metodológicos de la bioquímica moderna. De ahí que sea necesario tener claros los principios en que se basan los diversos tipos de precipitaciones.
Por lo general, la solubilidad de lasproteínas es variable. La mayoría de las proteínas globulares es soluble en agua, sea total o coloidalmente soluble, cuando están en su estado nativo. Cuando están desnaturalizadas las proteínas pierden su solubilidad. Cuando se dice que una proteína es coloidalmente soluble, se quiere indicar, o bien que las moléculas proteicas son de tamaño tan grande, que incluso, dispersas en solución tienen eltamaño y superficie que caracteriza las partículas coloidales, o que hay alguna fuerza que las hace formar agregados de tamaño coloidal.
De las proteínas globulares, las albúminas son solubles en agua pura, pero también solubles en soluciones salinas. Las glubulinas son insolubles en agua pura, pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio, y para permanecer ensolución las globulinas necesitan una cierta concentración de sal, precipitando cuando el contenido de sal disminuye. Las proteínas coaguladas son insolubles en agua, soluciones salinas, ácidos y álcalis diluidos. Se disuelven en los acidos minerales y álcalis fuertes, los que las hidrolizan, desdoblándolas a sus correspondientes aminoácidos.
El punto clave para entender la precipitación de lasproteínas es que la proteína es una molécula cargada tanto positiva como negativamente, y que por consiguiente, pueden reaccionar se entre si y con iones de cargas opuestas o con el agua. Podemos, por tanto, señalar tres tipos de interpretaciones de una proteína en solución. A) Proteína- proteína, B) Proteína- agua, C)Proteína- iones pequeños.
Si la interpretación proteína- proteína es grande y lainterpretación proteína- agua es pequeña, la proteína tenderá a ser insoluble. Si la situación es la contraria, o sea que predomina las interacciones proteína- agua, entonces las proteínas tienden a ser solubles. Por consiguiente, cualquier cosa que aumente o favorezca la interpretación proteína- proteína o disminuya la interacción proteína- agua, disminuirá la solubilidad de la proteína, favoreciendo suprecipitación y cualquier cosa que disminuya la interacción proteína- proteína y aumente la proteína- agua, aumentará la solubilidad de la proteína.
FUNDAMENTO
Precipitación por salación (salting out)
Si disminuye la concentración efectiva del agua, en una solución proteica añadiendo una sal muy soluble, se aumentara la interaccion proteína- proteína favoreciéndose la precipitación de laproteína. La gran cantidad de sal estará robándole a la proteína las moléculas de agua que la solubilizan. Como las proteínas varian en la proporción de cargas superficiales, las distintas proteínas precipitaran a distintas concentraciones de sal, proporcionando esto un método para lo que se llama “precipitación diferencial” de las proteínas. El procedimiento en general se llama en inglés “salting out”.En español es llamado de varias formas, siendo el más empleado el salado. La sal mas empleada para este efecto es el sulfato de amonio. Una solución saturada de sulfato de amonio es aquella que tiene 75 gr de sulfato de amonio por 100 ml de agua.
Precipitación por solventes orgánicos
Al añadir solventes orgánicos como etanol o acetona, a una solución acuosa de proteínas, se baja la...