Proteinas

Índice

2 pagina Indice

3 -4 pagina Introduccion

5 pagina Objetivos

6-7 pagina Preparacion experimental

8 pagina gráfico Absorbancia v/s concentración

9 pagina Materiales

10 pagina resultados

11-14pagina discucion

15 pagina conclucion

16 pagina Bibliografia

Introducción

Lapurificación de proteínas es una actividad usual en el trabajo en Bioquímica. La Caseína, la proteína primaria de la leche, es una fosfoproteína que existe en cuatro
formas: a, b, g y d caseína, cada una con composición aminoacídica diferente.

La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, ácido pantotéico y vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fósforo y metalesen pequeñas cantidades), proteínas (incluyendo todos los animoácidos esenciales), carbohidratos (lactosa) y lípidos. Los únicos elementos importantes de los que carece la leche son el hierro y la vitamina C. (1)

Por lo tanto la caseína es una mezcla heterogénea de componentes proteicos. La caseína puede ser extraída y purificada de la leche por precipitación con sales o por pH.
Las proteínasson solubles principalmente por los residuos de aminoácidos polares y
cargados que establecen interacciones con el agua. Cualquier agente que rompa estas
interacciones proteínas/agua disminuirá la solubilidad de la proteína y precipitara.

La Caseína puede ser separada por precipitación isoeléctrica a pH 4,6. La
Lactoalbúmina, junto a otras proteínas, permanece en solución de donde se puedeseparar por adición de HCl hasta pH 3,0 donde la Lactoalbúmina es insoluble.

Métodos para la cuantificación de proteínas: ventajas e inconvenientes (2)

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparaciónenzimática, para el diagnóstico de enfermedades, así como para otros muchos propósitos.

Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. En la Tabla I se recogenlos métodos más usados así como sus respectivas sensibilidades.

Método de Biuret:
cuando aquellas sustancias que contienen dos o más enlaces
peptídicos reaccionan con sulfato de cobre alcalino, se forma un complejo de color
púrpura. El color resulta de la coordinación de los átomos de nitrógeno peptídicos con los
iones Cu++. La intensidad del color depende de la concentración de proteína.
Sedebe preparar una curva de calibración usando soluciones estándar de proteína.
Estas son tratadas con el reactivo de Biuret y se mide la absobancia a la longitud de onda
adecuada. La muestra de la proteína desconocida se trata igualmente y su concentración
se determina de la curva de calibración.

(1) http://www.quiminet.com/ar4/ar_AAssarmadvc-caseina-una-proteina-de-la-leche.htm

(2)http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-mol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%20LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNAS.pdf

OBJETIVOS

- Realizar de manera experimental la extracción de la proteína (caseína)

- Cuantificar la concentración de proteína por el método de Biuret

Preparación experimental

a) Separación de la caseína

Al tomar 5 ml de leche descremada yla diluimos en 25 ml con H2O destilada.y luego
agregar lentamente (durante aprox. 5 min) 0,2 ml de HCl al 2%. El pH debe alcanzar a 4,5
(el cual comprobaremos con pH metro), donde se observa la precipitación de la caseína (pH isoeléctrico).
Agitamos por 5 min. Al dejar decantar en reposo por 15 min. Centrifuguamos. El residuo se lavo dos veces con 10 ml H2O destilada centrifugando cada vez....