Protocolo fermentacion

1. Pre-Inóculo: Del glicerol tomar una asada y sembrar en matraces de 125 ml (tapa de algodón y no-bafleados) con 25 ml de LB y LB-Sp 100 µg/µl por 10-12 horas.
2. Inóculo: Posteriormente leerdensidad óptica a 600 nm e inocular matraces de 500 ml (tapa metálica-bafleados) con 100 ml de medio LB, LB-Sp 100 µg/µl (y 10g/l de glucosa o xilosa) en un matraz con una D.O.inicial de 0.05. eincubar a: T: 37°C, agitación: 120 rpm, hasta alcanzar una D.O. de 1.0.

|Fleaker |Cepa |DO600 |mL a inocular |
|A | || |
|B | | | |
|C | | ||
|D | | | |
|E | | | |
|F || | |

3. Inocular
4. Ajustar la densidad a 0.1 (opcional: centrifugando a 4000 rpm por 15 min a 20°C).
5. En los Fleakers llevar un volumen200 mL de medio. Temperatura, pH y agitación, 37ºC, 7.0 y 100 rpm respectivamente. En medio de cultivo LB con 10 g/L de Glucosa, 10 g/L de xilosa; 5 g/L cada una de glucosa-xilosa y 4 g/Lglucosa-xilosa-arabinosa. Medir DO600nm, pH y KOH 2N adicionada.

EXPERIMENTO 1
Experimento Lote: Evaluar el crecimiento, consumo de glucosa, xilosa, arabinosa y de base en medio LB a B. subtilis 168,CVPTSGHISp y CV846 en condiciones no aireadas a 37° C y 100 rpm.

Fleakers: Volumen inicial de trabajo 0.2L
Temperatura y pH 37ºC, pH: 7.0
Velocidad de agitación 100rpm
Concentración inicial de azúcar 10 g/L glucosa, xilosa como únicas fuentes de carbono. 5 g/L cada fuente de C en la mezla de glucosa-xilosa. 4 g/L cada fuente de C en la mezcla de...