Pruebas Bioquimicas Secundarias Para La Identificacion Bacteriana

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios superior Cuautitlán

Microbiología general

Objetivos:

Conocer el fundamento y la aplicación de las pruebas bioquímicas secundarias, de tal manera que se pueda entender la lectura de los resultados arrojados por dichos ensayos.

Razonar la aplicación de dichas pruebas y asimilar la dependencia que estas presentan en funcióndel metabolismo bacteriano, ya que esto nos permitirá comprender las capacidades que posee dicho organismo para obtener energía y nutrientes del medio, así como conocer algunos factores del crecimiento que este requiera.

Introducción

La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluaciónde similitudes. Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.

Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrolladopara demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano.

Para llevarlas a cabo, se pueden utilizardiferentes sistemas de trabajo (medio de cultivo, indicador, revelador, etc.) que puede ser diferente aún para el mismo ensayo si se trata de diferentes microorganismos. Por ejemplo se debe suplir con factores de crecimiento el medio de cultivo para estudiar la fermentación de distintos azúcares cuando se sabe que el microorganismo en estudio es exigente.

En la actualidad existen diferentessistemas que facilitan la realización de tales ensayos, ya que se propone el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano, simplificando la interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, que permiten una total automatización.

Resultados

Prueba | Resultado | Observaciones |
Citrato | + | |
Malonato | + | |
Arginina | + ||
Reducción de Nitratos | + | Reducción hasta N2 |
Fenilalanina | - | |
MR (Rojo de Metilo | + | Revisión a las 24 hrs |
VP (Voger-Proskauer) | - | |
MIO (motility Iron Agar) | M= + | Se observo una tonalidad amarilla a las 24 hrs, que posteriormente desapareció al regresar a un pH alcalino |
| I= + | |
| O= + | |
KIA(Kliger Iron Agar) | Acido/Acido | Observación a las 24 hrs |
| Gas - | |
| SH2 - | |
SIM (Sulfidrilo Indol Motility) | S = - | |
| I = + | |
| M= + | |
LIA (Lisyn Iron Agar) | + | |

Análisis de resultados


Pruebas bioquimicas antes de la inoculacion
Las imágenes antes mencionadas son de vital importancia, debido a quelos cambios visibles, seran la pauta que nos permitira conocer si se es positivo o negativo el resultado obtenido y expresado por el organismo de estudio.

Fundamento e Interpretacion
Urea:
El sustrato urea es una diamina del acido carbonico. La urea es hidrolizada por una enzima especifica, la ureasa para dar dos moleculas de amoniaco. En solcuion la urea se hidroliza a carbunato de amoniocomo producto final
H2N
C=O + 2 H2O ureasa CO2 +H2O + 2NH3 (NH4)2 CO3
H2N urea carbonato de amonio
La ureasa es considerada encima constitutiva debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar en consideracion la presencia o ausencia de su sustrato, la urea. La ureasa se clasifica como...