Pràctica de Bioguímica - Pigments vegetals

Pràctica de Bioquímica
Extracció i separació de pigments


Objectiu de la pràctica:
Conèixer i portar a terme una extracció de pigments vegetals, des de la planta fins la
cromatografia enpaper. Els pigments vegetals que s’extrauran són els següents:
Clorofil·les A i B, Xantofil·les i Carotens.

Procediment a seguir:
Es tallen unes fulles de algun vegetal, en aquest cas espinacs,procurant que la fulla
sigui el més verda possible (significa un alt contingut de pigments) i evitant les més
joves.
Les fulles es trenquen a petits retalls amb l’ajuda d’unes tisores, procurant apartarles
venes de la fulla (solen ser llenyoses i amb pocs pigments). Els retalls es dipositen en
un morter juntament amb una mica de sorra (ajudarà a triturar les fulles i que
desprenguin l’aigua ambels pigments). S’hi afegeixen 30mL de etanol i es comença a
triturar les fulles.
S’aboca el líquid desprès per les fulles en 2 tubs d’assaig. S’intentaran separar diferents
pigments segons elsproductes que s’hi afegeixin a continuació:
Tub A

Tub B

S’hi afegeix 5mL d’èter de Petroli (de fet és
una barreja d’alcans, no és cap èter, també
es pot anomenar ligroïna).

S’hi afegeixen 2mLde Hidròxid de Sodi
(NaOH) al 20%. S’hi aboca també 5mL
d’èter de Petroli.

S’utilitza com a dissolvent No Polar.

Se sacseja el contingut del tub i es deixa
reposar perquè es formin dues fases(la
Polar, aquosa, i la apolar, de l’èter de
Petroli).

Se sacseja fortament i es deixa reposar
perquè apareguin les dues fases (Polar i No
Polar). Es pipeteja el contingut d’ambdues
fases ise separen en dos tubs diferents.

Amb l’ajuda d’una pipeta se separen les
dues fases en dos tubs diferents.

En qualsevol dels dos casos s’ha de procurar que la interfase no sigui pipetejada, jaque
es podrien barrejar continguts de les dues fases i alterar el resultat de la
cromatografia. S’ha de descartar.
Ara que es tenen les dues solucions es comença amb les cromatografies. Per a...