Prácticas de microbiología

PRÁCTICA 34 14/3/11

RUBELLA IgG

INTRODUCCIÓN:

La rubéola es endémica en todo el mundo , es causada por el virus de la Rubéola (G/ Rubivirus, F/ Togaviridae) y es una infección viral contagiosa de carácter leve que afecta principalmente a los niños y losadultos jóvenes . Se caracteriza por un exantema eritematoso de unos días de duración. Sin embargo, más del 50% de las infecciones por este virus no presentan manifestaciones clínicas.
Otros síntomas de la rubeola son febrícula, síntomas leves en vías respiratorias
y adenopatías. En los adultos jóvenes son síntomas frecuentes las artralgias y artritis, mientras que las complicaciones más graves,como la encefalitis y la púrpura trombocitopénica, son muy raras .
Aunque la rubeola en el niño y en el adulto suele ser una enfermedad benigna y de pronóstico favorable , la infección del feto durante el primer trimestre de gestación puede causar aborto espontáneo o defectos congénitos de nacimiento .
El síndrome de la rubéola congénita se conoce desde hace mucho tiempo y se
caracteriza porla presencia de cardiopatía congénita, sordera y retraso mental.

La presencia de anticuerpos maternos circulantes indica inmunidad frente al virus de la
rubeola y prácticamente excluye la posibilidad de transmitir la infección al feto .

La prueba ELISA ha demostrado ser un método
sensible y fiable para la detección de anticuerpos frente al virus de la rubéola

FUNDAMENTO:

El antígenorubeola purificado están adherido a la superficie de los micropocillos. El suero diluido del paciente es agregado a éstos, y, si se encuentra presente el anticuerpo específico de rubéola IgG, , se adhiere al antígeno. Todos los compuestos no adheridos son lavados para su retirada. Después de agregar el conjugado enzimático, éste se adhiere al complejo del antígeno-anticuerpo. El exceso deconjugado enzimático es lavado y se agrega el substrato. La reacción catalítica del conjugado es detenida en tiempo específico. La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de anticuerpo específico de IgG presente en la muestra. Los resultados son interpretados por un lector de ELISA y contrastados posteriormente frente a tres controles procesados a la vez.
MATERIAL NECESARIO:Reactivos: (proporcionados en el kit )

-Micropocillos en portatiras
-Control Rubella IgG negativo
-Control Rubella IgG positivo
-Control Rubella IgG cut-off
-Buffer de dilución
-Conjugado antígeno IgG
-Solución de lavado
-Reactivo substrato
-Solución de parada

Muestra:

Suero humano: Suero 202

Analizador automático para técnicas de ELISA (450nm)
Lavador automático paratécnicas de ELISA

MÉTODO:

1ª FASE:

-Realizar una dilución del suero problema en el buffer diluyente a razón de 1:100
-Utilizando una tira de micropocillos con el antígeno fijado pipetear los reactivos de acuerdo a esta tabla:

|A(blanco) |B |C |D |E |F |G |H(muestra) |
|--------- |100(l CN|100(l |100(l |100(l |100(l |100(l |100(l |
| | |CN |CC |CC |CP |CP |muestra |

-Incubar 30 minutos a temperatura ambiente
-Realizar cuatro lavados en el lavador automático para ELISA(anexo I)

2ª FASE:

-Pipetear en losmicropocillos el reactivo conjugado de IgG de acuerdo a la tabla

|A(blanco) |B |C |D |E |F |G |H(muestra) |
|--------- |100(l CON |100(l |100(l |100(l |100(l |100(l |100(l |
| | |CON |CON |CON...