Revolucion mexicana

MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

PRACTICA 2
PREPARACIÓN DE FROTIS, TINCION GRAM Y TINCIÓN DE ZIEHL-NEELS

ALUMNA:aldbert

FECHA DE ENTREGA: 30/AGOSTO/2010
OBJETIVOS
* 1.- Describir la técnica para hacer un frotis bacteriológico.
* 2.- Realizar correctamente un frotis y teñirlo por el método de Gram, así como explicar la utilidad e importancia de la tinción de Gram.
* 3.-Realizar la coloración de Ziehl-Neelsen y conocer su mecanismo, así como señalar su importancia de la técnica.

INTRODUCCIÓN
La tinción de Gram, descubierta hace poco más de 100 años por Hans Christian Gram, se usa con frecuencia para examen microscópico directo de muestras y subcultivos.
El cristal violeta (violeta de genciana) sirve como tinción primaria, uniéndose a la pared celular bacterianadespués del tratamiento con una solución débil de yodo, lo cual sirve como mordiente para la unión del colorante. Algunas especies bacterianas, debido a la naturaleza química de su pared celular, tienen la capacidad de retener el cristal violeta aún después del tratamiento con un decolorante orgánico, como la mezcla de partes iguales de alcohol etílico al 95% y acetona. Las bacterias que retienen elcolorante se ven azul/negro cuando se observan con el microscopio y se denominan gram positivas. Ciertas bacterias pierden la tinción primaria con cristal violeta cuando son tratadas con el decolorante, quizá debido al alto contenido lipídico de su pared celular. Estas bacterias decoloradas captan la contra tinción con safranina y se ven de color rojo cuando se observan con el microscopio y sedenominan gram negativas.
Las características tintoriales pueden ser atípicas en cultivos muy jóvenes, viejos, muertos o en degeneración.
También puede usarse tinción de Gram para identificar formas no bacterianas como tricomonas, larvas estrongiloides, quistes y trofozoitos de parásitos.
La técnica de Ziehl-Neelsen conocida también como “Tinción de ácidorresistencia”, debe su nombre a lanaturaleza ácida del decolorante empleado. Existe un grupo de microorganismos capaces de retener el colorante primario (fucsina) debido a que este colorante es más soluble en las sustancias lipídicas presentes en estos microorganismos que en la solución decolorante. Otra característica de esta tinción es el empleo de color como agente intensificados de la fucsina.

MATERIALES
* Microscopio
*Portaobjetos
* Asa bacteriológica
* Reactivos para la coloración de Gram
* Aceite de inmersión
* Cultivo bacteriano
* Mechero Bunsen
* Preparaciones fijas de bacilos alcohol acidorresistentes
* Fucsina
* Azul de metileno
* Alcohol-ácido
* Aplicadores de madera
* Solución salina fisiológica 0.9 %
TECNICA

A) SARRO DENTAL
1. En una laminillaportaobjetos colocar una gota pequeña de solución salina
2. Con un aplicador de madera raspar las partes internas y externas de los molares, la muestra obtenida mezclarla con la gota que esta en el portaobjetos.
3. Elaborar el frotis: extender la mezcla levemente, dejarla secar a temperatura ambiente y una vez seca fijarla al calor (pasar la laminilla dos o tres veces por la llama del mechero).
B)CULTIVO PURO BACTERIANO
1. En condiciones de esterilidad (según indique el profesor) tomar con el asa bacteriológica flameada y fría una pequeña muestra del cultivo bacteriano y proceder a realizar el frotis como se indica en el paso A.
2. Repetir estos pasos para el otro cultivo bacteriano.
C) TINCION GRAM.
1.- Preparar un frotis bacteriano de los cultivos proporcionados.
2.- Colocar el portasobre la bandeja de coloración.
3.- Agregar cristal violeta, dejándolo por un minuto.
4.- Descartar el exceso de colorante y lavar con agua brevemente y con suavidad.
5.- Aplicar el yodo de Gram (lugol), dejándolo reaccionar por un minuto.
6.- Descartar el reactivo y lavar con agua.
7.- Agregar con mucho cuidado, gota a gota, la solución decolorante hasta que las gotas de alcohol-acetona ya...