Separación de Proteínas

Generalidades métodos separación de proteínas
1.- Diálisis
Se utiliza generalmente para separar proteínas con moléculas de bajo peso molecular.
Permite que las moléculas grandes (en este caso las proteínas) y las pequeñas de una
disolución se puedan separar por difusión selectiva mediante la membrana
semipermeable porosa. Permitiendo así el paso sólo de las moléculas pequeñas. En estatécnica los solutos de una zona hipertónica pasan a una zona hipotónica. Como sabemos,
toda diálisis necesita de un dializador, este último es una mezcla de agua casi pura con
sales conocidas.
2.- Electroforesis.
Se utiliza para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo
eléctrico. Esta separación se puede utilizar en una superficie hidratada de un soporte
sólido, en unamatriz porosa o en una disolución.
Esta técnica se usa generalmente en el ADN recombinante para poder conocer las carga
de los polipeptidos y así separarlos. Es utilizado en una matriz porosa por tener un
soporte de gel.
Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, estas moléculas se
moverán y las más pequeñas tendrán mayor velocidad.
En estricto rigor, la electroforesis sedefine como el método de separación de sustancias
cargadas al aplicar un campo eléctrico, de modo que se diferencian en el diferente
comportamiento en un campo eléctrico. Aquellas partículas cargadas positivamente
(cationes) migrarán hacia el cátodo y las cargadas negativamente (aniones) hacia el
ánodo.
Al igual que en la centrifugación también hay dos criterios de separación con el mismoconcepto:
•
Electroforesis analítica: orientada a la búsqueda de propiedades de un solo
componente.
•
Electroforesis preparativa: orientada a la separación entre gran cantidad de
componentes
3.- Cromatografía
Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar lascantidades de dichos componentes. El método está basado en la circulación de una fase
móvil (que arrastra a la mezcla de compuestos a separar), a través de una fase
estacionaria. Si uno de los disolventes se mantiene fijo (Fase Estacionaria) se puede
hacer desplazar el otro disolvente (Fase Móvil) sobre el primero. Las sustancias a

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cromatografía se veránsometidas a una distribución entre las fases estacionaria y móvil
de modo que las más solubles en la fase móvil avanzarán más que las que sean retenidas
por la fase estacionaria. De acuerdo con el mecanismo que produce la separación, se
puede hablar de distintos tipos de cromatografía:
3.1.- Cromatografía Intercambio Iónico
Los intercambiadores iónicos son redes tridimensionales demacromoléculas con un
determinado número de cargas electrostáticas fijas por unidad estructural. El proceso de
intercambio es: reversible en la mayor parte de los casos, las reacciones se llevan a cabo
de acuerdo al principio de electroneutralidad, en muchos casos el equilibrio se alcanza
sólo muy lentamente. Se puede llevar a cabo en forma estática o dinámica.
Es una técnica de alta resolución,flexibilidad de operación y versatilidad de aplicación, se
debe considerar la estabilidad de los solutos a separar frente al pH. Las propiedades de la
matriz deben ser tal, que excluyan la retención de moléculas por otros métodos
cromatográficos.
3.2.- Cromatografía de Afinidad
La Cromatografía de Afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad
o capacidad de unión a undeterminado ligando. La cromatografía de afinidad tiene una
serie de características generales que la distinguen de otros tipos de cromatografía
líquidas
• Alta selectividad en el mecanismo de retención
• Campo de aplicación restringido
• Separación de un solo soluto analito
• Empleo de sistema de baja presión
• Columnas cortas de escasa eficacia cromatográfica
La cromatografía de afinidad es...