Sorgo forrajero

PATCH CLAMP
Técnica de fijación de membranas (en ingles patch clamp)
En electroscopia la fijación de membranas es una técnica de laboratorio que permite el estudio individual o múltiple de canales iónicos. Esta técnica puede ser aplicada en una amplia variedad de células, pero es especialmente útil en el estudio de células excitables como las neuronas cardiomiocitos, fibras musculares y célulaspancreáticas beta. También puede ser aplicada al estudio de los canales iónicos en las bacterias principalmente en esferoplastos gigantes preparados. La fijación de membranas es una mejora de la abrazadera de voltaje, desarrollada por Erwin Neher y Bert Sakmann a finales de los 70 y comienzos de los 80. Este descubrimiento registró las corrientes de un canal iónico por primera vez, demostrando suparticipación en prosesos fundamentales de la célula como la conducción del potencial de acción. Neher y Sakmann recibieron el Premio Nobel en Fisiología o Medicina en 1991 gracias a este trabajo.
Técnica básica
Archivo:Patch clamp.svg
La abrazadera de pedazo conectada por célula usa una micropipeta conectada a la membrana célula para permitir a la grabación de un solo canal ionico l.
Lagrabación en la fijación de membrana usa una micropipeta como electrodo que tiene una punta abierta de cerca de un micrómetro de diámetro, un tamaño que encierra un área superficial que a menudo contiene uno o pocos canales iónicos moleculares. Este tipo de electrodo es diferente del Sharp micorelctrode utilizado para implantar células en registros intracelulares tradicionales donde es sellado en lasuperficie de la membrana celular, en lugar de insertarlas. En algunos experimentos la punta de la micropipeta es calentada en una micro forja para producir una superficie suave que ayuda a formar un sello de alta resistencia con la membrana. El interior de la pipeta es llenado con la solución correspondiente a la composición iónica de la solución de baño, como en el caso de la grabación conectadapor células o el citoplasma de todas las células. Un alambre de cloruro de plata es puesto en contacto con esta solución y conduce la corriente eléctrica al amplificador. El investigador puede cambiar la composición de la solución o adicionar medicinas para estudiar los canales iónicos bajo diferentes condiciones. La micropipeta presiona otra vez la membrana celular para ayudar a la formación deun sello de alta resistencia entre el vidrio y la membrana (un gigasello ya que la resistencia eléctrica es mayor a la de un sello gigahom). La gran resistencia de este sello hace posible aislar eléctricamente las corrientes moderadas a través de la fijación de membrana con la incursión de poco ruido, de esta forma brinda una estabilidad mecánica a la grabación. A diferencia de la grabacióntradicional de la abrazadera de voltaje con dos electrodos, la fijación de membranas usa un solo electrodo para registrar corrientes. Muchos amplificadores de la fijación de membranas no utilizan un verdadero circuito de abrazadera de voltaje sino amplificadores diferenciales que utilizan un electrodo para establecer el nivel cero de corriente. Esto permite al investigador mantener un voltaje constantemientras se observa cambios en la corriente. Alternativamente puede ser sujetada completamente manteniendo la energía constante mientras se observan cambios en el voltaje de la membrana.

Un esferoplasto arreglado con una pipeta de cristal
Variaciones
Algunas variaciones pueden ser aplicadas dependiendo de lo que el investigador quiera estudiar, las técnicas “inside-out” y “ outside-out” sellaman membrana extirpada ya que la membrana es removida de la superficie principal de la célula. Las técnicas de agrupación de células y membrana extirpada son usadas para estudiar el comportamiento de canales iónicos individuales en la sección de la membrana unida al electrodo. El “whole-cell patch” y el parche perforado permite al investigador estudiar el comportamiento eléctrico de toda la...