Tecnica de catalasa y coagulasa

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Como ya sabemos, el objetivo es esta técnica es extender lo más posible el inoculo con el fin de obtener colonias aislada.
1° Paso: Comenzando por tomar y descargar el Inoculo en el primer plano de nuestro estriado, acontinuación quemar el haza de simbra para evitar una mayor carga bacteriana en el cultivo.
2°: luego estriar el segundo plano perpendicular a nuestro primer estriado, y repetir lomismo con el ultimo estriado logrando completar todo el espacio de la placa
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que seincorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.

“Pruebas Bioquímicas”
Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa. Se trata de un enzima queoxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a púrpura.
Prueba de la Catalasa
El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa. El peróxido de hidrógeno se produce alutilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + ½ O2).
Prodecimiento:
Agregamos aproximadamente 5 ml. de peróxido de hidrógeno al 3% a un tubo de ensayo previamente esterilizado a continuacion tomamos una muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y laintroducimos por el tubo de ensayo, la muestra solamente debe acercrse a la muestra de la solucionliíquida de peróxido de hidrogeno y debemos observar la reacción de esta. La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.
Resultados:
(+) Staphylococcusaureus
( - ) Streptococcusspp.
Prueba de la Coagulasa
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma.El objetivo es buscar en factor de aglutinación de los microorganismos cuando estos se mezclan con el plasma. Esta prueba se
utiliza para diferenciar microorganismos del genero Staphylococcus.
Procedimiento:
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazon) y 0,3 ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La muestra ya contiene cepas de St. Aureus.Tapamos el tubo de ensayo con algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C durante una hora, observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora, sacamos las muestras y observamos sus resultados.
Resultados:
Estratificaremos los resultados en 4 distintos niveles:
1: pequeños coágulos no organizados
2: pequeños coágulos organizados
3: gran coágulo organizado
4: todo elcontenido aparece coagulado y se mantiene cuando invierte el
tubo.
Se consideran positivos los niveles 3 y 4.
(+) Staphylococcusaureus
( - ) Staphylococcus epidermis.
Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine ó Motilidad-Indol-Ornitina) Esta prueba bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Procedimiento:
Inocular enpicada las cepas de micro organimos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37° .
Prueba TSI (Triple SugarIron ó Triple Azúcar Hierro)
El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. Tambien permite la identificación de la
producción de SH2. Esta es una prueba...
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