Tecnica pcr

BIO RAD
PCR LÁTEX
(PRUEBA DIRECTA)
(Cat. 72100280)
* Breve discusión de la prueba:
En 1930 Tilet y Francis (1) reportaron una reacción de precipitación que se lleva a cabo entre el suero de pacientes que padecían neumonía lobar y un extracto de polisacáridos proveniente de capas de neumococo.
El extracto neumocóccico era un carbohidrato denominado C y a la proteína humana selectiva capaz deprecipitar se le denomino Proteína C Reactiva.
Independientemente de la neumonía lobar, la proteína C reactiva se ha asociado a una gran variedad de enfermedades infecciosas, a procesos inflamatorios no infecciosos y a ciertos padecimientos malignos (2).
La demostración de niveles elevados de proteína C reactiva es una prueba no específica de inflamación, la cual es virtualmente positiva entodas las infecciones agudas bacterianas, en algunos estados neoplásicos y en varios tipos de destrucción de tejidos como el infarto al miocardio.
La prueba es usada frecuentemente para monitorear la actividad en pacientes con fiebre reumática y artritis reumatoide (3).
La regresión del proceso inflamatorio es acompañado en forma general por un decremento en los niveles séricos de proteína Creactiva.
La elevación de la velocidad de sedimentación eritrocitaria (VSG) se acompaña de la presencia de PCR, pero la elevación de esta ocurre ante el aumento de la velocidad de sedimentación eritrocitaria, disminuyendo antes que la VSG retome a los niveles normales.
La proteína C reactiva aparece en el suero en la forma de complejo de glicoproteína.

*Fundamento de la prueba
La prueba de PCRlátex se basa en una técnica desarrollada por Sanger, et al (8). Las moléculas biológicamente inertes de poliestireno látex son sensibilizadas con anti PCR, obtenida de animales por medio de inmunizaciones. La proteína C reactiva en el suero del paciente sirve como antígeno y cuando el suero conteniendo PCR se mezcla con látex sensibilizado se produce una aglutinación detectable macroscópicamente.*Descripción de los reactivos:
Reactivo de látex sensibilizado: suspensión de partículas de poliestireno látex en amortiguador salino de glicina de pH 8.2.
Las partículas de látex están sensibilizadas con anti PCR humana obtenida de animales. El producto contiene azida de sodio al 0.1% como conservador y debe ser almacenado de +2 a +8ºc (275 a 281ºK) cuando no se utilice. No debe ser congeladoy debe tenerse cuidado de que el gotero este bien cerrado para evitar la evaporación del fluido y que pueda ocurrir la formación de agregados no específicos de las partículas.
Suero control positivo: suero humano estabilizado conteniendo proteína C reactiva a concentraciones de > 6mg/l.
Reactivo control negativo: contenido albumina sérica bovina al 1%, merthiolate al 0.1% y azida de sodio al0.1% el cual ha sido probado como no reactivo con la suspensión de látex sensibilizado.
Los sueros control se suministran listos para su uso, no requieren ninguna dilución y den ser almacenados entre +2 a +8ºc (275 a 281ºK). No deben ser congelados y contienen azida de sodio al 0.1% como conservador.
Una vez abiertos los frascos de los reactivos arriba citados, deben conservarse bien cerradosentre +2ª +8ºc (274 a 281ºK).
No deben usarse si presentan turbidez o si existe desarrollo de hongos.
Cualquier dilución necesaria debe realizarse con solución salina al 0.85%.

*Recolección de la muestra y preparación:
No se requiere ningún tipo de preparación del paciente para la obtención de la muestra, la sangre se recolecta por punción venosa, se deja coagular y el suero se separa porcentrifugación.
El suero se debe separar tan pronto como se recolecte y conservar el refrigeración entre +2 a +8ºc (275ª 281ºK) hasta que se realice la prueba, si esta no se lleva a cabo dentro de 72 horas es necesario congelar las muestras para detener el desarrollo bacteriano.
Los sueros contaminados o lipemicos producen resultados falsos positivos.
El plasma obtenido con anticoagulantes no...