tecnico

PRÁCTICA 10.
PERFUSIÓN

OBJETIVO:
Aprender la técnica de perfusión a través del estudio del sistema circulatorio mayor y menor.

FUNDAMENTO:
Fijación.
Es el procedimiento de la técnicahistológica, que tiene como finalidad, conservar de manera permanente, una estructura lo más semejante al estado que tenía in vivo.
Métodos de fijación.
Inmersión:
Es el método más utilizado ysimple desde el punto de vista técnico. Utiliza recipientes con tapa de cierre hermético que evita la evaporación del fijador que contiene. Como norma se dice que la cantidad de fijador a utilizar, está enuna proporción de 10:1. Esto quiere decir, que la cantidad de fijador debe ser 10 veces mayor al tamaño de la muestra a fijar.
Este tipo de fijación tiene como limitación, que extrae con frecuenciasustancias intracelulares, por lo que su uso depende del objetivo final de la técnica
Evaporación:
Utilizado para fijar células aisladas y membranas. Este método impide la extracción desustancias intracelulares.
Perfusión:
En el método de mayor utilización en animales de experimentación, ya que el líquido fijador es inoculado en el sistema circulatorio del espécimen, por lo tanto, fijaen principio de adentro, hacia fuera de los órganos a estudiar, lo que da excelentes resultados cuando la técnica es realizada con éxito.
Hay dos tipos de fijación por perfusión: De gran circuito yde pequeño circuito. El primero, se realiza inoculando el fijador a partir del corazón (ventrículo izquierdo) por lo que la fijación ocurre en todos los órganos del espécimen; en la de pequeñocircuito, el fijador se inyecta solo en una porción del animal, fijando solo la parte de interés para el investigador. Ej. Se inocula la arteria renal si lo que se requiere es solo el riñón.

REACTIVOS
1litro de Solución fisiológica ml al 0.9%
650 ml de Buffer fosfatos (ver anexo)
65 ml de Formaldehido al 37 %

MATERIAL
Dos recipientes de suero, uno con fijador, y el otro con solución...