Tinción de Grahm

Introducción:
La tinción de Gram es la técnica principal utilizada para el examen microscópico de las bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clínica pueden detectarse con este método; las únicas excepciones son los microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las células huésped, los que carecen de pared celular y los que tienen un tamaño insuficiente para serobservados con el microscopio óptico (Forbes, 2009).
La tinción de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX y puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en dos grandes grupos, a saber, las que captan el colorante básico, cristal violeta, es decir, las bacterias Gram positivas; y las que pierden ese colorante por lavado con el decolorante alcohol oacetona, es decir, las bacterias Gram negativas
Las Gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicán y carecen de membrana externa, mientras que las Gram negativas tienen una capa más delgada de peptidoglicán y poseen una membrana externa.
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues simultáneamente presentan tinción de Gram positivas y de Gram negativas, aun bajo condicionesóptimas de cultivo. Sin embargo, es su estructura estas bacteras poseen una pared de Gram positivas, aunque la capa de peptidoglicán es más delgada que la mayoría de las bacterias Gram positivas (Tortora, et al., 2007).
Esta tinción además, correlaciona con otras propiedades como endotoxinas, susceptibilidad a antibiótico, sensibilidad o resistencia a sales biliares, punto isoeléctrico y tensiónsuperficial.
Se han descrito modificaciones de esta técnica orientadas a resolver, especialmente en la concentración y preparación del cristal violeta, así como en el tipo de solvente orgánico empleado como agente decolorante; por lo tanto si se cuenta con varias modificaciones es importante no confundir los reactivos de cada una, pues los resultados pueden ser inadecuados (Rodriguez Cavallini, 2003).Objetivos:
Que el alumno:
1. Clasifique algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a la tinción diferencial de Gram.

Material:
Cultivos bacterianos
Mechero
5 portaobjetos
Agua destilada
Cristal violeta
Safranina
Lugol
Aceite de inmersión
Microscopio compuesto de campo claro

Metodología:
En esta práctica la maestra expuso la manera enque se fija una muestra en seco sobre un porta objetos y la forma en que se realiza la tinción Gram, aparte de, la manera en que se pude identificar y diferenciar las bacterias Gram positivas y Gram negativas. Posteriormente, se le proporcionó a cada alumno un cultivo bacteriano y el material necesario para poder realizar cada uno, su muestra fija y hacer una tinción Gram sobre ésta. Una vezrealizada la tinción Gram, correctamente, cada alumno, procedió a analizar la muestra con el microscopio a distintos objetivos, y con ayuda del aceite de inmersión se llego al aumento más grande (40x), que el microscopio tenía, y con el que se pudieron observar e identificar mejor a las bacterias obtenidas de las colonias del cultivo bacteriano proporcionado por el laboratorio.
Resultados:
TINCIÓNDIFERENCIAL GRAM
Procedimiento
Fotografía
Extracción de la bacteria de una de las colonias formadas en el cultivo bacteriano.

Disolución de la bacteria en agua oxigenada para hacer el frotis.

Fijación del frotis a base del calor del mechero.

Se cubría la muestra con violeta de genciana (primer colorante) y se dejaba reposar por un minuto.

Lavado de la muestra con agua oxigenada paraeliminar excesos del colorante.

Se coloco el lugol sobre la muestra, para que actúe como mordente, es decir como fijador del colorante, y se deja reposar durante 30 seg.

Lavado con agua oxigenada para eliminar excesos del mordente.

Se procedió a dar otro lavado con alcohol para eliminar por completo la tinción excedente del primer colorante. Después, se dio otro lavado con agua oxigenada...