Tincion

Introducción

Al querer estudiar los microorganismos, nos presentamos ante una problemática que escapa a las capacidades de nuestro cuerpo, las que son la imposibilidad de verlos a simple vista, ya que son demasiados pequeños, para ello utilizamos el microscopio, con el cual aumenta significativamente el tamaño de las estructuras, mostrándonos sus por menores. Pero aún así, la visibilidadde estos resulta dificultosa debido a su transparencia o falta de contraste ante el microscopio óptico, por ello, es necesario algún tipo de coloración que nos permita distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, etc.
La tinción, permite obtener un contrasteentre los microorganismos y su entorno, así como también entre sus estructuras, dejando una mayor visibilidad y claridad.

Objetivos

El objetivo de esta experiencia es conocer los diferentes tipos de tinción, utilizar una de ellas; la tinción Gram, diferenciar entre la tinción Grampositiva y la tinción Gramnegativa y por último utilizar la tinción de endosporas. Para así observarlas a travésdel microscopio y diferencias los tipos de bacterias que se utilizaron.

Desarrollo

Fundamentos

Tinciones

Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los
mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante. Los colorantes pueden ser de distintos tipos:

• Catiónicos. Sonsustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.
• Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.
• Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y lostiñen. Ejemplo: negro sudán.

Las tinciones pueden ser:

• Simples. Se utiliza solo un colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células de un solo color (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).

• Diferenciales. Sebasan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (deZiehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un colorante.

Esta tipo de tinción es de de gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa depeptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa.

• Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos.Pueden utilizarse uno o más colorantes.

El procedimiento en la tinción Gram es el siguiente:
Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de azul.
El portaobjetos se cubre...