Tinciones Permanentes De Parasitos

OBJETIVO DE LA PRACTICA
Que el alumno se familiarice con diferentes técnicas de tinción de parásitos para
poder distinguirlos al microscopio y utilizarlas en diagnóstico.
INTRODUCCION
En la mayoría de los casos los protozoarios intestinales se pueden observar
bien con tinciones temporales, como es el caso de los exámenes directos con
lugol, solución salina o Sudán, como se vió enprácticas anteriores. En algunas
ocasiones es necesario teñir los parásitos en forma definitiva, para obtener
preparaciones permanentes; otras veces estas tinciones son necesarias porque
se necesita distinguir algunas de sus estructuras celulares, usando tinciones
especiales permanentes. Algunos parásitos requieren tinciones especiales, para
poder observarse. El inmunodiagnóstico puederealizarse recurriendo a la tinción
con anticuerpos marcados con colorantes fuorescentes, permitiendo una
identificación más fácil.
Las preparaciones fecales permanentes son hechas por diferentes razones:
- Proporcionan información sobre el material estudiado. ( ej: tinción de
Romanowsky)
- Utiles en la identificación exacta de flagelados (eJ: tinción de Romanowsky,
tinción deFierro-hematoxilina)
- Cuando el parásito no puede ser detectado en preparaciones en fresco o por
técnicas de concentración, la tinción permanente de material fecal fresco puede
revelar la presencia de parásitos intestinales (ej: tinción de Romanowsky,
tinción Trichromo, Tinción de ziehl Neelsen modificada)
- Son útiles en la demostración de patrones nucleares de quistes, facilitando laidentificación (Tinción de fierro-hematoxilina, tinción Tricromo)
MATERIALES Y METODOS
1. Tinción de Romanowsky
a) Tinción modificada rápida de Field:
Es una modificacion de la tinción de Field, que permite una tincion rápida de
frotes delgados y fijados de varias muestras clínicas. Es muy útil para tinciones
de frotes fecales, exudados fecales y aspirados duodenales. Una tinción
permanente deRomanowsky (ej: Giemsa o tincion rápida de Field) debe ser
usada para diarrea sanguinolenta y para heces semi-formadas con sangre y/o
muco. Proporciona información sobre el exudado presente, presencia de trofozoítos de flagelados como Giardia lamblia. Permite determianr la presencia
de protozoarios que son difíciles de detectar o no son detectados en
preparaciones en fresco, comoBlastocystis hominis.
Metodo.
a. Haga un frote delgado de heces o de exudado fecales. Deje secar al aire libre.
b. Fije con metanol por 1 minuto.
c. Cubra el frote con 1 ml de colorante de Field (colorante B) (diluido 1:4 con
agua destilada)
d. Añada inmediatamente un volumen igual de colorante concentrado de Field
(colorante A), mezcle bien y deje colorear por 1 minuto.
e. Enjuague conagua de la llave y escurra para secar.
f. Los flagelos, cilios y núcleos se tiñen de rojo, mientras que el citoplasma de
azul.
b). Tinción de Giemsa
El colorante de Giemsa puede ser usado para frotes de heces no-formadas,
exudados fecales y aspirados duodenales.
Método
a. Haga un frote delgado de exudado fecal. Deje secar al aire libre.
b. Fije en metanol por 1 minuto. Escurra y dejesecar.
a. Cubra el frote con colorante Giemsa diluido 1:10 con agua destilada. Cada
vez debe prepararse el colorante.
b. Deje colorear por 20-25 minutos.
c. Lave con agua de la llave y no deje precipitar el colorante en el frote. Deje
secar al aire libre.
d. Examine el frote a 100 X.
e) Los Flagelos, cilios y núcleos se tiñen de rojo y el citoplasma azul.
Colorante de Giemsa: 1 gde polvo de Giemsa + 66 mL de glicerina calentado a 50
grados durante 2 horas, añadir 66 mL de actohol metílico absoluto, dejar a temperatura
ambiente 7-14 días (maduración). Filtrar antes de su empleo.
2. Tinción de Tricromo
El método de tricromo para teñir protozoarios es recomendado especialmente
para identificar características de quistes y trofozoitos de amibas
Solucion A:...